DB32T 1772-2011 副猪嗜血杆菌病诊断技术　.docxVIP

ICS65.020.30

B22

备案号：

DB32

江苏省地方标准DB32/T1772—2011

副猪嗜血杆菌病诊断技术DiagnosticTechniquesforHaemophilusparasuis

2011-05-06发布2011-07-06实施

江苏省质量技术监督局发布

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DB32/T1772—2011

前言

为规范副猪嗜血杆菌病的诊断技术，特制定本标准。

本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。

本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准起草人：刘茂军、邵国青、周勇岐、王海燕、冯志新、孙佩元、甘源。

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DB32/T1772—2011

副猪嗜血杆菌病诊断技术

1范围

本标准规定了副猪嗜血杆菌病诊断技术要求。

本标准规定的分离鉴定和PCR法适用于本病的确诊，间接血凝试验适用于大批量样品的普查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修订单）适用于本文件。

GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541动物疫病实验室检验采样方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

副猪嗜血杆菌病

副猪嗜血杆菌病，又称格拉泽氏病或革拉泽氏病(Glasser’sdisease)，该病由副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,HPs）引起，可以影响各年龄段猪，主要在断奶前后和保育阶段发病，通常见于5～8周龄的猪，表现为猪的纤维性多发性浆膜炎、关节炎、胸膜炎和脑膜炎等。

4诊断

据流行病学、临床症状和特征病变可作出初步诊断，典型病变PCR检测病原可确诊。4.1流行性病学诊断

副猪嗜血杆菌只感染猪，感染2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶前后和保育阶段发病，通常见于5周龄～8周龄的猪，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达到50%。在敏感猪群内，副猪嗜血杆菌引起的死亡主要发生在幼猪。

4.2临床诊断

由副猪嗜血杆菌引起的急性型疾病是非特异性的但却是特征性的，临床症状包括发热、食欲不振和厌食，严重时可见呼吸困难、发绀、不愿活动、关节肿胀、跛行、运动不协调以及死亡。

急性发病耐过猪可以痊愈,但病症严重，猪耐过后往往表现慢性病症，主要是被毛粗乱、咳嗽、呼吸困难和生长迟滞。有些猪由于发生脑膜炎而表现肌肉震颤、麻痹和惊厥，有些因腹膜粘连而常引起肠梗阻。

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DB32/T1772—2011

4.3病理变化

肉眼可见的损伤主要是在单个或多个浆膜面，可见浆液性和化脓性纤维蛋白渗出物，这些浆膜包括腹膜，心包膜和胸膜，这些损伤也可能涉及脑膜和关节表面，尤其是腕关节和跗关节。胸腹腔积液或粘连，关节肿胀、关节腔粘液增多，肺脏出血、表面有纤维素性渗出物附着，全身淋巴结水肿、出血。在显微镜下观察渗出物，可见纤维蛋白，中性粒细胞和较少量的巨噬细胞。病死猪及病料应符合按GB16548的规定。

5病原学诊断

除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682—2008的灭菌二级水。5.1病原分离与鉴定

5.1.1材料准备

巧克力琼脂平板，鲜血琼脂平板，TSA固体培养基，TSB液体培养基，副猪嗜血杆菌标准菌株，细菌微量生化鉴定管，灭菌棉拭子等。

5.1.2病料采集

按NY/T541规定的方法，采集呼吸道分泌物，采取具有特征的肺脏、肝脏、脾脏、胸膜、胸腹腔积水、心包积液、心血、关节液和脑组织。

5.1.3病原分离

采集样品，首先在巧克力琼脂平板、TSA固体培养基、鲜血琼脂平板上分别划线接种，37℃培养48h～72h以后挑取单个菌落，再进行纯培养并鉴定。

细菌涂片，革兰氏染色镜检。如果为革兰氏阴性小杆状或多形性小杆菌，再进行一次巧克力琼脂亚克隆培养，同时接种鲜血琼脂平板和普通琼脂平板。

巧克力琼脂平板生长良好，而鲜血琼脂平板和普通琼脂平板没有菌落生成则菌株保存待进一步鉴定。

5.1.4病原鉴定

5.1.4.1生长特性试验

挑取被检分离株和副猪嗜血杆菌标准株菌落接种绵羊鲜血琼脂平板和2%胨琼脂平板上，再以金黄色葡萄球菌点种或垂直划线，置37℃培养48h。

观察葡萄球菌菌落周围菌落生成情况，如愈靠近金黄色葡萄球菌菌落生成的半透明菌落愈大，愈远的愈小，甚至不