微生物限度检查法.ppt

微生物程度检查法;目录;一、简述微生物程度检查的意义;细菌、霉菌、酵母菌计数均采用平板菌落计数法，这是活菌计数措施之一，也是目前国际上许多国家常用的一种措施。

该措施以在琼脂平板上，每个细菌（营养琼脂）、霉菌（玫瑰红钠琼脂）、酵母菌（玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂）形成一种独立可见的菌落为计数根据。;测定成果只反应在规定条件下所生长的细菌（一群在营养琼脂上发育的嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数。不包括对营养、氧气、温度、PH和其他原因有特殊规定的细菌、霉菌和酵母菌。;一种细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一种或多种菌细胞形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数（colonyformingunit，CFU），而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。;二、设备;无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈凹弧形无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。

操作间与缓冲间之间应有样品传递箱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。;无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（２～２.5W/m3），紫外杀菌灯应距试验台面高度不超过1M，并应定期检查辐射强度，不得低于70μW/cm2（１M距离）。不符合规定的紫外杀菌灯应及时更换。;1.2温度、湿度

无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀菌效果，故温度应控制在18～26℃，相对湿度40～60％。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压、不低于4.9Pa。;1.3操作间

操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不应低于是C级，局部净化度为A级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉等。;1.4缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。

1.5洁净级别及检查措施一般采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。;洁净室（区）空气洁净度级别表;;;在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。

无菌室操作台或净化工作台要定期检测其洁净度，应到达A级。净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测状况，必要时予以更换处理。;1.6消毒处理无菌室应在每次操作前、后均用消毒液擦拭操作台及也许污染的死角。开动层流净化妆置，同步用紫外杀菌灯照射30min。;2.2其他设备

净化工作台、电热恒温水浴箱、培养箱、电热恒温干燥箱，微波炉（或其他合适加热装置）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）、薄膜过滤装置、电动匀浆仪等。;2、仪器及器皿

2.1菌落计数器、显微镜、电子天平或药物天平，pH计等

2.2玻璃器皿

锥形瓶、烧杯、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液管等

;玻璃器皿用前应洗涤洁净，无残留抗菌物质吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的合适疏松棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。;3用品

3.1大、小橡皮乳头（放于洁净带盖的容器中，并应定期用70%～75%乙醇溶液浸泡）。

3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。;3.3接种环(白铱金或镍铬合金，环径4～5mm、长度6～10cm)、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、洗手盆、试验记录纸等。;4试液

4.1消毒液

4.1.10.1%新洁尔灭、0.2%过氧乙酸、75%乙醇溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。

4.1.23%的来苏尔溶液、5%石碳酸溶液(配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用；当菌液污染台面或地面时，将其倾覆其上)

4.1.375%乙醇溶液

4.1.4乳酸、15%过氧乙酸（交替用于对洁净室熏蒸消毒）;4.2稀释剂和试剂

4.2.10.9%无菌氯化钠溶液

4.2.2无菌聚山梨酯-80（对含油性供试品具有助溶作用）

4.2.4pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液

4.2.5pH6.8磷酸盐缓冲液

4.2.6pH7.6磷酸盐缓冲液等

;5培养基

5.1营养琼脂培养基

5.2玫瑰红钠琼脂培养基

5.3酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基

5.4胆盐乳糖培养基

5.4MUG培养基;培养基制备应注意：

（1）采用干燥培养基，按阐明配制，应对灭菌后的培养基p