细胞工程的理论基础.pptVIP

五、细胞培养的工作原则有标准化的工作方法培养用的液体极多（如培养液、胰蛋白酶、HANKS液及抗菌素等），应由专人负责，并保证做到按规程行事，配制浓度准确，灭菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要标明名称、浓度、消毒与否和制备日期等。一切培养用品都要有固定的存放点，避免杂乱无章，其中尤其重要的是：培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒品与未消毒品应分别存放。第二节组织培养的细胞生物学一、体内外细胞的差异和分化体内外细胞的差异培养细胞最多见的表现是：失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，出现类似“反祖”现象；表现为细胞趋单一化，或获得不死性，或变成具有恶性性状的细胞群。相对孤立、相对单一缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响与体内主要不同主要表现失去原有组织结构和细胞形态

分化减弱或不显

细胞趋向单一化；提示要正确认识体外培养细胞

是一种特定条件下生长的细胞群体。（二）培养细胞的分化1．不适应(Deadaption)：表现为，细胞在原体内时所拥有的分化特性减弱或不显，如肝细胞产生酪氨酸转移酶(TyrosineAminotranserase)特性的丧失.2．脱分化或去分化(Dedifferentiation)细胞也可能出现脱分化或去分化，即细胞失掉发生分化的能力。二、培养细胞形态分类粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。按生长方式:2型体外细胞培养物的生长类型粘附:是大多数有机体细胞在体内1生存和生长发育的基本存在方式2含义两方面3结果基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，4有机体的绝大多数细胞必须5粘附于一固相表面6才能生存和生长。7贴附(粘附)型细胞培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞0201类型01细胞在体内、外的粘附方式：存在差异02体内：粘附是全方位03外形具有复杂的立体特征04体外：多数情况，细胞只有一个附着平面05外形一般与体内时明显不同06按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型070102030405分类根据形态大致的不同，主要2类：上皮细胞型成纤维细胞型其它，不定型01名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于--02来源：来源于外胚层，内胚层细胞03如：皮肤及其衍生物04消化道，乳腺，肺泡05上皮性肿瘤06形态：类似体内的上皮细胞07扁平，不规则多角形，中有圆形核上皮细胞型体外培养细胞类型（1）——上皮细胞型生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—

铺石状生长时呈膜状移动很少脱离细胞群而单个活动01名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的02来源：由中胚层间充质组织起源的组织03如：真正的成纤维细胞04心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮05形态：似体内成纤维细胞的形态06胞体梭形或不规则三角形07胞质向外伸出2—3个长短不等的突起08中有卵圆形核成纤维细胞型生长特点排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而

单独行动游离的单独的成纤维样细胞，

常有几个伸长的细胞突起体外培养细胞类型（2）——成纤维细胞型如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但

发展趋向不同与体内同名的细胞不完全相同条件改变，细胞形态可有变化培养细胞的形态不稳定贴附生长型--类型培养细胞形态不稳定

血清Hela高血清低血清

成纤维细胞样上皮样细胞

pHHela太酸或太碱标准pH

成纤维细胞样上皮样细胞

细胞密度3T3低密度高密度

成纤维细胞样上皮样细胞生长状态改变

悬浮或贴附悬浮贴附