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实验九硫氰酸汞比色法测定血清氯

亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力01握硫氰酸汞比色法测定血清氯化物的原理。02掌握亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力原理。【目的要求】【实验原理】血清氯化物的氯离子与未解离的硫氰酸汞溶液混合时，氯离子首先与汞结合形成难以解离的氯化汞，并释放相应的硫氰酸离子，此离子与试剂中的铁离子结合，生成红色的硫氰酸铁，其色泽与氯的含量呈正比。【实验操作】取试管4支加入物试剂空白管标准管测定空白管测定管血清0.10.1氯标准液0.1空白试剂3.0显色应用液3.03.03.0混匀，置室温10min,以试剂空白管调零，在460nm波长处比色，分别读取各管的吸光度。氯化物（mmol/L）=（A测-A测定空白）/A标*100【计算】脑脊液氯化物120-132mmol/L尿液氯化物170-250mmol/L【参考范围】血清氯化物96-108mmol/L此法对其他卤族元素也防身同样的呈色反应。但在正常人血液中上述元素含量低，可忽略不计。本法校正曲线不经过原点，但汞离子调控适当，在70-140mmol/L范围线性良好。可用于自动生化分析仪。显色液的呈色强度与硫氰酸汞和硝酸汞的含量有关。如呈色过强，线性范围在125mmol/L以下，增加硝酸汞的用量；呈色太弱，增加硫氰酸汞的用量，使用前二者进行调整，使其色泽在460nm波长，10cm光径比色杯测定，吸光度在0.4左右为宜。本法呈色温度应不低于20度，室温过低易产生浑浊，影响比色。每批标本测定，应同时测定正常和异常值得质控血清，所得值应该在允许误差范围内，否则应查找原因。【注意事项】【评价】线性范围75-125mmol/L01干扰试验胆红素达到225.7umol/L，结果增加2.9%，Hb达到5g/L，结果增加3.3%，β-脂蛋白达到15.94g/L和17.0g/L时，结果分别增加4.3%和7.8%。03显色稳定性2h内呈色稳定02【原理】血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，被还原成二价铁，在于亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物，与同样处理的铁标准液比较，求得血清铁含量。01总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即总铁结合力。02亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力【实验操作】1、血清铁测定取试管3支加入物空白管标准管测定管血清0.2铁标准液0.2去离子水0.2甘氨酸-盐酸缓冲液1.01.01.0混匀，37度5min,于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白）亚铁嗪显色液(B)0.20.20.2混匀，37度5min,再次读取各管吸光度。2、血清总铁结合力测定在试管中加入血清0.45ml，179umol/LTIBC铁标准液0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀，放置室温10min,加入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次，3000r/min离心10min,取上清液操作。取试管3支加入物空白管标准管测定管血清0.45铁标准液0.45去离子水0.45甘氨酸-盐酸缓冲液1.21.21.2混匀，于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白）亚铁嗪显色液0.050.050.05混匀，放置室温15min,再次读取各管吸光度。