举个粒子系列 快快查收这份小鼠酸性粒细胞的科研实验思路速递.pdf

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举个“粒”子系列④:快，快查收这份~小鼠酸性粒细胞的科研实验思路速

递

1、HumanMouse造血干细胞到嗜酸性粒细胞的分化途径

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2、嗜酸性粒细胞的特征

①骨髓中成熟的嗜酸性粒细胞

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②外周血中活化状态的嗜酸性粒细胞

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③嗜酸性粒细胞的各种特征

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3、嗜酸性粒细胞实验方法学文章分享

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嗜酸性粒细胞是一类在体内稳态和各种人类疾病中具有多种功能的粒细胞。然而，由于技术上的差异阻止了传统的

单细胞RNA测序图谱。

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因此，人们对嗜酸性粒细胞的异质性和支持其不同功能的基因调控网络仍然知之甚少。本次分享一篇来自2024年

4月份natureprotocols的文章，该文章从小鼠组织内分离获得嗜酸性粒细胞，并捕获RNA，揭示了不同组织外周

血、骨髓环境中的酸性粒细胞微环境。

【1】实验思路框架

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①样本采集：骨髓，外周血，脾脏，肠道，肺脏等

②通过机械、酶消化将组织处理为单细胞悬液，通过梯度密度离心裂红处理外周血和骨髓样本

③-④通过MACS简介标记的磁珠分选方式，将酸性粒细胞特异性分选

⑤通过流式完成分选前后的细胞活性、细胞纯度鉴定

⑥通过BDRhapsody的混样试剂盒，将不同来源样本混合处理

⑦通过微孔板完成单细胞分离、RNA捕获、文库制备等

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⑧测序、数据分析、结果输出

【2】细胞实验第一步，样本制备铺好路

（点击可查看不同样本制备实操细节）

针对外周血的样本制备，该文提供了详细Ptotocol，并提出了优化步骤：

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采集血液，加入梯度密度离心试剂。800g下离心20min后，将中间层细胞转移到含有PBS的50mL锥形管中。获得

的细胞重悬后并进行红细胞裂解。裂红采用了两种方式，一种是冰蒸馏水（30s），一种是氯化铵-钾（ACK）缓冲液（3-5

min），都可用于从含有白细胞的样本中去除红细胞。

采集血液，用组织标本进行分层。在800g下处