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课堂互动探究案3生物技术在其他方面的应用
考点一DNA的粗提取与鉴定及PCR技术(国考5年未考)
任务驱动·探究突破
任务1完善试验原理
(1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
溶解规律
2mol/L
NaCl溶液
0.14mol/L
NaCl溶液
DNA
______
______
蛋白质
NaCl溶液物质的量浓度从2mol/L渐渐降低的过程中,溶解度渐渐______
部分发生盐析沉淀
______
(2)DNA不溶于________,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分别。
(3)DNA与二苯胺在沸水浴加热,呈______色。
任务2DNA的粗提取与鉴定试验中的“2、4、4”
加蒸馏
水2次
①加到鸡血细胞液中,使血细胞吸水涨破;
②加到含DNA的2mol/L的NaCl溶液中,使NaCl溶液的物质的量浓度稀释到0.14mol/L,使DNA析出
用纱布
过滤4次
①过滤血细胞裂开液,得到含细胞核物质的滤液;
②过滤用2mol/L的NaCl充分溶解的DNA,滤去溶液中的杂质;
③滤取0.14mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物);
④过滤溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液
用NaCl
溶液4次
①加2mol/L的NaCl溶液,溶解提取的细胞核物质;
②用0.14mol/L的NaCl溶液使DNA析出;
③用2mol/L的NaCl溶液,溶解滤取的DNA黏稠物;
④用2mol/L的NaCl溶液,溶解丝状物用于鉴定DNA
易错提醒DNA粗提取试验中的三个留意点
(1)本试验不能用哺乳动物成熟红细胞作试验材料,缘由是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。
(2)因DNA简洁被玻璃容器吸附,试验过程中最好运用塑料的烧杯和试管,削减提取过程中DNA的损失。
(3)每次用玻璃棒搅拌时都要沿同一方向,防止打碎DNA分子。
任务3完善PCR相关操作流程
材料的选取:选用______含量相对较高的生物组织
↓
裂开细胞:(以鸡血为例)鸡血细胞→加______→用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液
↓
去除杂质:利用DNA在____________________中溶解度不同,通过限制NaCl溶液的浓度去除杂质
↓
DNA的析出:将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的______溶液
↓
DNA的鉴定:在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂,混合匀称后将试管置于沸水中加热5min,溶液变成______色
任务4通过PCR技术(多聚酶链式反应)扩增DNA片段
(1)______:在肯定的缓冲溶液中供应______,分别与两条模板链相结合的两种______,四种脱氧核苷酸,热稳定______,同时限制温度使DNA复制在体外反复进行。
(2)PCR的反应过程
①______:当温度上升到______以上时,双链DNA解旋为单链,如下图:
②______:系统温度下降至______左右时,两种______通过碱基互补配对与两条单链DNA结合,如下图:
③______:当系统温度上升至72℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在________的作用下,依据碱基互补配对原则合成新的DNA链,如下图:
(3)结果
①PCR一般要经验______多次循环,每次循环可以分为______、复性和______三步。
②两引物间固定长度的DNA序列呈______扩增(即______)。
考向分类·对点落实
考向一对DNA粗提取过程的考查
1.[江苏卷]图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”试验中部分操作步骤示意图,下列叙述正确的是()
A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同
B.图1中完成过滤之后保留滤液
C.图2中完成过滤之后弃去滤液
D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质
2.[江苏卷]下列关于“DNA的粗提取与鉴定”试验叙述,错误的是()
A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料
B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水
C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌,可见玻璃棒上有白色絮状物
D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热,冷却后变蓝
3.[经典模拟]下列关于DNA粗提取与鉴定试验的叙述,正确的是()
选项
试剂
操作
作用
A
柠檬酸钠溶液
与鸡血混合
防止血液凝固
B
蒸馏水
与鸡血细胞混合
保持细胞形态
C
蒸馏水
加入到溶解有DNA的NaCl溶液中
析出蛋白质
D
冷却的酒精
加入到过滤后含DNA的NaCl溶液中
产生特定的颜色反应
4.对DNA进行鉴定时,做如下操作:
试管
序号
A
B
1
加2mol/L的NaCl溶液5mL
加2m
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