细胞的基本培养技术.pptVIP

040301乙二胺四乙酸二钠，非酶性消化物EDTA工作液用不含钙离子和镁离子的BSS配制成0.02%的浓度用于消化分离传代细胞，能螯合钙离子，镁离子，通常和0.25％的胰蛋白酶1：1合用02EDTA法培养操作的基本要领和要求原代培养操作传代培养操作细胞计数细胞培养应注意的问题细胞活力的测定方法Section3：细胞的基本培养技术能维持的代数

一般是有限细胞系

种族(主要):成纤维细胞

人,50;猴,40;鸡,37;鼠,8

部位:人:胚肺50±10;肾8~19

猴:肺5;肾20;耳40

条件:如表皮细胞+EGF从50代

增加至150

年龄

肝细胞：脾细胞：小鼠肝细胞和脾细胞原代培养两周后，进行传代培养模拟实验（2）细胞传代方法根据细胞生长的特点，传代方法有3种：1、悬浮生长细胞传代离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l/2一2/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。2、半悬浮生长细胞传代此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。3、贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液（含0.02%EDTA）。贴壁生长细胞传代方法1、吸尽（或倒掉）培养瓶中的培养液2、加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）静置2-10min（显微镜下动态监测）。3、吸去胰蛋白酶液，加入培养液（可终止胰酶的作用）。4、用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。5、吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内。6、加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。7、将后者放入培养箱中培养。动物细胞的传代培养3旋转管培养21悬滴培养培养瓶培养54细胞同步化培养克隆培养（见后）常用细胞培养技术Cellculture*BiologyofcellsincultureFluidforcellcultureStandardcellculturetechniquesEstablishingacelllineorcellstrainCellfreezingandrecoveryAnimalCellEngineering◆0102Chapter4AnimalCellCulture培养操作的基本要领和要求原代培养操作传代培养操作细胞计数细胞培养应注意的问题细胞活力的测定方法Section3：细胞的基本培养技术无菌操作防治污染；成功或失败的首要条件培养前准备操作卡片用品置于场地，然后消毒操作野消毒洗手和着装火焰消毒培养操作基本要领和要求（1）动作准确敏捷01不用手触及已消毒物品02操作面布局合理03操作保持一定顺序04培养用瓶和吸管的放置05防止各种用液的交叉污染06不向操作野讲话或咳嗽07培养操作基本要领和要求（2）某生物技术公司招聘操作面试：小鼠肝细胞（组织块）和脾细胞原代培养操作前（准备工作）：操作中（分离、培养的具体方法）操作后（清洁）模拟实验（1）1）培养前准备：制定实验计划和操作程序。2）超净台要用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30分钟，工作台面上用品不要过多或重叠放置。3）个人进入无菌培养室原则上须彻底洗手并按外科手术要求着装，开始操作前要用75%酒精或0.2%新洁而灭消毒手和前臂。4）实验中需保持无菌操作要求。实验前要点燃酒精灯，烧过的器械要注意冷却，以防细胞损伤。5）分别使用不同吸管吸取营养液、PBS、细胞悬液及其它各种用液，而不能混用6）不要用手触及已消毒的器皿，如已接触，要用火焰灼烧或取备用品更换。7）注意操作时勿大声讲话或咳嗽。010203040506培养操作的基本要领和要求原代培养操作传代培养操作细胞计数细胞培养应注意的问题细胞活力的测定方法Section3：细胞的基本培养技术动物细胞培养过程图解概念

从体内取出组织细胞开始培养到第一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然的生长阶段。完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育的能力取材——分离细胞——接种0102原代培养Primarycul