小鼠扁桃体免疫细胞受照射后DNA双链断裂损伤修复的忠实性.pdf

第20卷第2期辐射研究与辐射工艺学报Vol.20,No.2

2002年5月J.Radiat.Res.Radiat.Process.May2002

小鼠扁桃体免疫细胞受照射后

双链断裂损伤修复的忠实性

吴玮屈昌民吴代民

(中国人民解放军第三0六医院北京100101)

摘要观察了受照射小鼠瓦尔代尔扁桃体环(WRE)在体细胞出现DNA双链断裂修复的忠

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实性,用Co射线照射后观察WRE细胞凋亡的最高峰,在此时间点处死小鼠,取WRE细胞分

别用脂质体和电穿孔方法介导的基因转染技术,将双标记基因质粒pPMH16导入细胞。研究

WRE细胞DNA双链修复的忠实性。结果表明,未照射WRE细胞的抗G418转化克隆有69.75%

的gpt基因表达,说明大部分断裂的gpt基因被忠实性地修复;2Gy、4Gy射线照射的WRE细胞的

转化克隆只有36.05%和21.50%的克隆能正确表达gpt基因功能,说明WRE细胞照射后DNA双

链断裂的修复显著低于正常细胞,且剂量越大,修复的忠实性越低。脂质体和电穿孔方法介导的基

因转染技术可用于原代细胞基因转染的研究,照射后的WRE细胞易发生DNA双链断裂错误重

接。

关键词DNA修复忠实性,基因转染,WRE细胞,辐射损伤

中图分类号Q782,R818.74

[1]

免疫细胞是辐射的高敏感细胞,我们观察到小鼠瓦尔代尔扁桃体环(WaldeyersRing

EquivalentWRE)细胞受照射后,细胞DNA发生了断裂,这种断裂触发了一系列的凋亡事件。

与此同时,DNA又在进行自身修复,WRE细胞凋亡率也在经历了凋亡高峰后逐渐减少,然而,

这只是断裂的DNA和WRE细胞的一个量的恢复。照射后经历了凋亡高峰渐恢复的细胞

DNA质的恢复如何,即基因序列的正确性如何?这将直接影响细胞功能的正常发挥。修复的

准确性或忠实性对机体免疫功能的恢复至关重要,本工作用双标记基因质粒DNA转染技术,

对受照射WRE在体细胞DNA双链断裂的修复的忠实性进行了探讨。

1材料和方法

1.1实验动物

昆明种小鼠,雄性,体重20g2g,北京医科大学动物中心提供。

1.2照射条件

60-1

采用Co射线照射,剂量率为1.5Gy!min。

1.3主要试剂及质粒的准备

质粒pPMH16,北京放射医学研究所赠送,带有两个选择标记基因(neo和gpt)。A液:

DMEM+10%小牛血清,B液:A液+2(g/mLPHA+100/mLIL-2,C液:B液+0.75mg/

mLG418,D液:C液+10%XHATM,XHATM选择培养液含10g/mL黄嘌呤、15g/mL次

黄嘌呤、0.2g/mL氨基喋呤、5g/mL胸腺嘧啶、25g/mL霉酚酸。DNA抽提试剂盒

(Promega公司产品)。pPMH16质粒用EcoRV酶切,然后在紫外分光光度计上测DNA含量。

1.4细胞凋亡率的检测及单个核细胞和滋养细胞的制备

采用碘化丙啶(PI)常规方法,根据凋亡测试结果小鼠2Gy、4Gy照射后8h取WRE组织,

总装备部医药卫生重点科研课题基金(299004)资助

第一作者:吴玮,女,1963年8月出生,1998年毕业于第二军医大学博士,临床免疫专业,副主任医师

收稿日期:初稿2001-08-15,修回2001-11-28

第2期吴玮等:小鼠扁桃体免疫细胞受照射后DNA双链断裂损伤修复的忠实性147

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