细胞生物学研究方法4学时.pptVIP

2、扫描电子显微镜scanningelectronmicroscope,SEM20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构目前扫描电镜的分辨力为6~10nm。Figure3-23.Scanningelectronmicroscopy.Scanningelectronmicrographofthestereociliaprojectingfromahaircellintheinnerearofabullfrog(A).Forcomparison,thesamestructureisshownbydifferential-interference-contrastlightmicroscopy(B)andbythin-sectionelectronmicroscopy(C).扫描隧道显微镜

scanningtunnelingmicroscope,STMBinnig和Rohere1981年发明，1986年获奖；可观察到原子级的图像。X-raycrystallographyX射线衍射NMRspectroscopy核磁共振成像第二节细胞组分的分析方法一、用离心技术分离细胞器与生物大分子普通离心机：转速≦25000r/min超速离心机：≧30000r/min在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。1、差速离心

differentialcentrifugation细胞器沉降顺序：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体。2、密度梯度离心

densitygradientcentrifugation030201用介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，细胞混悬液或匀浆置于介质顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。常用介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖分为速度沉降（velocitysedimentation）和等密度沉降（equilibriumsedimentation）。其它生化分离方法纸色谱柱色谱亲和色谱Figure3-42.SDSpolyacrylamide-gelelectrophoresis(SDS).Figure3-44.Separationofproteinmoleculesbyisoelectricfocusing.Figure3-45.Two-dimensionalpolyacrylamide-gelelectrophoresis.二、细胞内核酸、蛋白质、糖等成分的显示方法为了对某些细胞成分进行定性和定位研究，利用染色剂可与细胞某种成分发生反应而着色的原理加以显示，称为组织化学和细胞化学染色方法（histochemicalandcytochemicalstainingmethod）；如：细胞内DNA和RNA的原位显示MyofibrillarATPase:IdentifyingFastandSlowFibersSuccinateDehydrogenase(琥珀脱氢酶):IdentifyingOxidativePotentialPromoter:GUS是根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术，常用的标记物有荧光素和酶免疫荧光法（immunofluorescenttechnique）酶标免疫法（enzyme-labeledantibodymethod）免疫细胞化学immuno-cytochemistry二、细胞内特异蛋白质的定位和定性免疫荧光法酶标免疫法0102030405利用分子探针检测细胞内特殊DNA序列、和RNA基因表达的方法。细胞内特异核酸序列的定位和定性原位杂交（insituhybridization）人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片果蝇HB基因表达的原位杂交照片**********第二章细胞生物学研究方法

Chapter2MethodsinCellBiologyResearch细胞形态结构的观察方法Methodsforobservingcellmorphologyandstructures细胞组分的分析方法Methodsforanalyzingcellconstituents细胞培养、细胞工程Cellcultureandcellengineering细胞及生物大分子的动态变化Dynamicanalysisofbiologicalma