人乳头瘤病毒(HPV)58...NA疫苗免疫原性的初步分析_吴雪伶.pdf

DOI:0．3242／j．cnki．bingduxuebao．0096

第24卷第3期病毒学报Vol．24No．3

2008年5月CHINESEJOURNALOFVIROLOGYMay2008

人乳头瘤病毒（HPV）58型DNA疫苗免疫原性的初步分析

吴雪伶‚聂建辉‚张春涛‚吴瑜‚赵晨燕‚王佑春∗

（中国药品生物制品检定所‚北京00050）

摘要：为了检测HPV58型不同L基因的DNA苗的免原性‚以pcDNA3∙为载体分别构建含HPV58型不

同L基因的DNA苗‚命名为Lh、Lh△c、LS、LSM和Lwt。用免印迹法检测各DNA苗的体外表达情

况；各重组质粒与pcDNA3∙-h58L2和pcDNA3∙-GFP共转染293FT细胞‚检测其形成假病毒的能力；并将各

DNA苗肌肉注射免小鼠‚利用假病毒中和实验检测中和抗体水平‚用ELISPOT检测细胞免情况。结果显

示‚本实验成功构建了五种DNA苗‚Lh△c的体外表达量最高‚LS和LSM的表达量次之‚Lwt没有表达；

重组质粒LS能够形成假病毒‚而其他四种重组质粒均不能形成假病毒。LS和Lh均可在小鼠体内诱导中和抗

体‚但LS诱导的中和抗体的平均滴度为：6400‚明显高于Lh诱导的中和抗体水平（平均滴度为：48）‚而其他

苗在小鼠体内未产生中和抗体。对五种苗均未检测出特异性的细胞免反应。结果提示‚体外能够组装成假

病毒的DNA苗在免动物后可诱导高滴度的中和抗体‚为今后DNA苗的筛选提供参考。

关键词：人乳头瘤病毒58型；密码子优化；DNA苗；假病毒；中和试验

中图分类号：R372∙文献标识：A文章编号：000-872（2008）03-096-06

宫颈癌是危害女性健康的第二大恶性肿瘤‚宫

颈癌的发生与人乳头瘤病毒（Humanpapillomavir-材料与方法

us‚HPV）的持续感染密切相关‚95％以上的宫颈癌

病理组织中能够检测到HPVDNA。HPV有001菌株和质粒大肠杆菌DH5α、表达载体pcDNA3∙为

多种基因型‚根据其致病性不同可将人乳头瘤病毒本室保存；含野生型HPV58L基因的pcDNA3∙重组质

分为高危型和低危型两种‚高危型HPV感染是引粒Lwt为吉林大学孔维教授惠赠；含密码子优化的L、L2

起宫颈癌的主要原因‚包括HPV6、8、3、33、45、基因的质粒p58SHELL为美国国家癌症研究所JohnT∙

Schiller教授惠赠。

52、58、59、68等型‚其中HPV6和HPV8是最常

2实验动物以及细胞BALB／c小鼠‚雌性‚6～8周龄‚购

见的基因型‚能够引起70％以上的宫颈癌。但高危

自本所实验动物中心。293FT细胞由本实验室保存‚完全培

型HPV在不同国家流行情况也不同‚在我国和一

养基为含0％胎牛血清、％非必需氨基酸、％L-谷氨酸和

些亚洲国家‚58型是仅次于6型的第二常见高危％双抗的DMEM高糖液体培养基。

［‚2］

型‚甚至有报道我国江西省HPV58的检出率与3密子的优化与基因合成利用VectorNTISuite6∙0

［2‚3］

HPV6相似。软件在不改变蛋白氨基酸序列的情况下‚将氨基酸序列按照

目前对于HPV6和HPV8的报道很多‚而对哺乳动物细胞偏爱密码子反翻译成核苷酸；若相邻的两个氨

于HPV58的研究还很少‚鉴于HPV58在我国宫颈