DB37T 2032-2012 布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验诊断技术　.pdfVIP

ICS65.020.30

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T2032—2012

布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验

诊断技术

CompetitiveEnzyme-linkedImmunoassayDiagnosticCriteria

onBrucellaInfection

2012-02-09发布2012-03-01实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T2032—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山东省农业科学院提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、山东省动物疫病预防与控制中心。

本标准主要起草人：杨宏军、田夫林、何洪彬、侯明海、仲跻峰。

I

DB37/T2032—2012

布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验诊断技术

1范围

本标准规定了动物布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验诊断技术的操作要求。

本标准适用于动物布鲁氏菌感染特异抗体的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T18646-2002动物布鲁氏菌病诊断技术

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

布鲁氏菌病Brucellosis

布鲁氏菌（Brucella）感染引起的急性或慢性人兽共患传染病，表现为流产，主要感染山羊、牛、

猪及绵羊等，可导致人发热出汗、肝脾肿大、骨关节炎、睾丸炎和心内膜炎。

4试剂及仪器

4.1试剂

流产布鲁氏菌光滑型脂多糖抗原包被的微量板

冻干单克隆抗体

辣根过氧化物酶标记交联物

20倍浓缩吐温磷酸盐缓冲液PBS-Tween

样本稀释缓冲液

底物溶液（含HO的四甲基联苯胺底物缓冲液,避光！）

22

终止液（含硫酸）

A阳性对照血清

B阴性对照血清

C弱阳性对照血清

4.2仪器

1

DB37/T2032—2012

精密移液器（5-200μL）

酶标仪，450nm滤光片

5检测方法（竞争酶联免疫吸附试验）

5.1样品的采集和处理

被检动物血液采集及血清分离参照GB/T18646-2002。

5.2操作步骤

5.2.1试验所有试剂回温到18-25℃。

5.2.2对照和样本的稀释

在微量板内直接稀释样本和对照：在微量板孔内加入45μL样本稀释缓冲液。

a)加入5μL血清对照。分别于适当孔内加入阳性对照、弱阳性对照和阴性对照。

b)在2个适当的孔内（作为交联物对照控制，Cc）加入5μL样本