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淀粉酶活性的测定一、实验目的掌握测定淀粉酶活性的原理熟悉测定淀粉酶活性操作方法方法一：3，5-二硝基水杨酸测淀粉酶活性一、实验目的掌握用3，5-二硝基水杨酸测淀粉酶活性的方法01熟悉3，5-二硝基水杨酸测淀粉酶活性的原理02基本原理测量依据淀粉酶催化淀粉分子中α-1,4糖苷键水解,产生还原糖淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比，可以单位体积样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。相关反应:logo：淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。具体反应式为：实验设备1试管，滴管，容量瓶，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，电磁炉。2实验设备：操作步骤0.1mol/lpH5.6的柠檬酸缓冲液：A液：称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml；B液：称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml；取A液55ml与B液145ml混匀。1%可溶性淀粉溶液：1g淀粉溶于100ml0.1mol/lpH5.6的柠檬酸缓冲液；实验试剂及其配制：操作步骤0.4mol/L的NaOH溶液；1%3,5-二硝基水杨酸试剂：称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入；pH6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。麦芽糖标准溶液：取麦芽糖0.1g溶于100ml水中；淀粉酶溶液实验步骤01取试管：取试管4支,2支为对照管,2支为测定管。03加试剂：在4支试管中各加入1mlpH5.6的柠檬酸缓冲液和淀粉酶溶液lml。05淀粉酶活力测定02装溶液：在2支对照管中分别加入4m10.4mol/L氢氧化钠。04基本操作操作步骤保温：将4支试管置另一个37℃恒温水浴中保温15min,再向各管分别加入37℃下预热的1％淀粉溶液2m1,摇匀,立即放入37℃恒温水浴保温5min。取出后向测定管迅速加入4ml0.4mol/L氢氧化钠,终止酶活动,准备测糖。麦芽糖的测定：标准曲线的制作:取试管7支,编号.分别加入麦芽糖标准液（1mg/ml）0,0.2,0.6,1.0,1.4,1.8,2.0ml，然后用吸管向各管加蒸馏水使溶液达2.0ml,再各加3,5一二硝基水杨酸试剂2.0m1,置沸水浴中加热10min，取出冷却,用蒸馏水稀释至25m1。混匀后用分光光度计在520nm波长下进行比色,记录吸光度，以吸光度为纵坐标，以麦芽糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线（操作的关键环节）样品的测定:取酶作用后的各管溶液2m1,分别放入相应的8支25ml具塞刻度试管中,各加入2m13,5-二硝基水杨酸试剂。置沸水浴中加热10min.取出冷却,用蒸馏水稀释至25m1。混匀后用分光光度计在520nm波长下进行比色,记录吸光度，根据样品比色吸光度平均值,从标准曲线查出麦芽糖含量,最后进行结果计算。计算公式：相关实验实验拓展
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