向日葵种子纯度蛋白电泳检测标准(DB37∕T3105-2018).pdf

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B21

向日葵种子纯度蛋白电泳检测标准

2018-02-02发布

山东省质量技术监督局发布

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山东省农业厅提出。

本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东农业大学、北京德农种业有限公司。

本标准起草人：张春庆、赵洪春、郑建鹏、温大兴、李岩。

本标准为首次发布。

I

向日葵种子纯度蛋白电泳检测标准

1范围

本规程规定了蛋白质电泳的试剂配比、蛋白质提取、凝胶制备、电泳、染色、判别分析等技术要求。

本规程适用于向日葵品种及杂交种种子的纯度室内的快速鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB3543种子检验技术规程

GB20464农作物种子标签通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

杂交种

各种直接用于生产的杂交向日葵一代种子。

3.2

品种纯度

品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。

3.3

标准样品

能够充分代表种或品种特征特性的种子样品，或具备指定特征、特性样品。

4原理

4.1不同品种遗传组成不同，在种子形成时期合成的蛋白质不同。

4.1.1不同的蛋白质由于分子大小、形状不同，在一定的pH条件下所带的电荷多少不同，因此在电场

作用下，在凝胶中移动的快慢不同，通过电泳可以把不同的蛋白质区分开，近而区分不同的亲本和杂交

种。

4.1.2利用该电泳技术，杂交种具有不育系和恢复系的双亲谱带，双亲有差异蛋白谱带是杂交种纯度

检测的关键位置。

1

50之间细分为50等份作为标尺，50以下的部分按该标尺进行区分，读取泳道内所有蛋白指纹所处位置

的数值，记为蛋白质谱带名称。

1力)

1川)))

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图1蛋白质谱带命名示意图

5仪器与试剂

5.1仪器

电泳仪，恒温箱，电冰箱，观片灯。

5.2试剂

丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，冰醋酸，过硫酸铵，尿素，四甲基乙二胺(TEMED),三氯乙酸，考马

斯亮蓝R-250,十二烷基磺酸钠(SDS),无水乙醇(所用试剂均为分析纯，所用水均为去离子水)。

6溶液

6.12SDS

贮存备用。

6.2蛋白提取液

2

加去离子水定容至100mL,转入试剂瓶并加入0.05g甲基绿，4℃贮存备用。

6.3凝胶溶液

硫酸亚铁，加去离子水定容至500mL,4℃贮存备用。

6.4催化剂溶液

称取1.75g过硫酸铵，加去离子水溶解并定容至50mL,4℃短期贮存。

6.5电极缓冲液

量取20mL冰乙酸加水定容至1000mL。

6.6染色液

离子水500mL,搅匀。

7操作程序

7.1蛋白质提取

机4000g离心4min,取上清液备用。

7.1.2与标签值比较时，为了减少工作量，可以顺序测定50粒/次，将测定结果与标签值比较是否在

允许误差范围内。

7.2凝胶制备

将洗净晾干的玻璃板采用水平平板灌胶的方式组装玻璃板，用铁夹固定，取40mL凝胶溶液于烧杯

中，加65μL～80μL催化剂溶液，迅速搅匀沿玻璃棒向玻璃板中倒满凝胶溶液，迅速插入样品梳，2min~

3min聚合后将样品梳拔出，吸出样品槽中的水分，