血糖影响因素及血糖测定.pptVIP

血糖影响因素及血糖的测定浙江中医药大学生命科学学院生化教研室【实验目的】学习体内哪些激素对血糖浓度有影响。学习和掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和操作方法。【实验原理】人和动物血糖浓度受神经、激素的调节，维持相对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两种重要激素，前者使血糖浓度降低，后者使血糖浓度升高。葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及４－氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。与葡萄糖标准溶液比较，可计算得到血浆葡萄糖浓度。0102【实验试剂与器材】01速效胰岛素、盐酸肾上腺素、抗凝剂（草酸钠或草酸钾、肝素钠、柠檬酸三钠）02禁食四小时以上兔子两只03葡萄糖试剂盒（Ｒ１、Ｒ２、标准液）04酶标板、板条、微量进样器、注射器、烧杯05酶标仪、生化培养箱注射激素前后血浆样品制备（1）动物准备:正常家兔两只,实验前禁食4小时以上,称体重.记录并标号。⑵取血：在耳缘静脉处进行，用酒精棉擦拭兔耳，使血管扩张，用棉花擦干，用针筒采血或于取血处涂薄层凡士林，然后用刀片割破耳缘静脉，将血液收集于草酸钠抗凝管（每ml约需2mg草酸钠）内,边接边摇,以防凝固，取约5ml，用普通离心机2000rpm离心10分钟，取上清分装备用，编号为兔血清①、②；注射激素后再取血:将一家兔皮下注射胰岛素(1单位/kg体重),另一只家兔皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重).分别记录在注射时间.注射肾上腺素20分钟,胰岛素30分钟后,按上述方法或颈静脉取血各取5ml于抗凝管内,用普通离心机2000rpm离心10分钟，取上清分装备用，编号为兔血清③、④血浆样品萄葡糖测定工作试剂配置：取一支试管，加入R14.5ml与R20.5ml混合。取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管A1，标准管A2.A3，测定管A4.A5，A6.A7，A8.A9，A10.A11（做两管取平均值，可减少实验误差）3214混匀，37℃保温15min，以空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度值。计算血糖含量=A样/A标×标准溶液浓度0102加入物（ul）A1A2A3A4A5A6A7A8A9A10A11葡萄糖标准液33蒸馏水3兔血浆①33②33③33④33工作试剂300300300300300300300300300300300混匀置于37℃孵育箱，反应10min后，在酶标仪上进行比色测定，测定波长为492nm，用空白管A1调零，读取标准管及测定管吸光度。血浆葡萄糖浓度=×标准管葡萄糖浓度(5.55mmol/L)