高效液相色谱的特点与仪器.ppt

关于高效液相色谱的特点与仪器*第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日*一、液相色谱仪器（highperformanceliquidchromatograph）第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日*WatersLC2695第3页，共37页，星期日，2025年，2月5日*IC4500i第4页，共37页，星期日，2025年，2月5日*1.分离效能高GC分离效能较高，n=103塔板/米，HPLC可达到5×103~3×104塔板/米，可使用较短的柱子。二、高效液相色谱法的特点2.选择性高HPLC柱效高，流动相可以控制和改善分离的选择性。3.检测灵敏度高HPLC广泛采用高灵敏度检测器，如UV（10-9g/mL），荧光检测器（10-11g/mL）。HPLC的优点第5页，共37页，星期日，2025年，2月5日**4.分析速度快HPLC载液流速可达1~10ml/min，完成一个样品分析仅需几分钟到几十分钟。5.应用范围广HPLC法不受样品沸点、挥发度和热稳定性限制，适于分析生物大分子、离子型化合物、不稳定的天然物及各种高分子化合物。原则上相对分子量大于400的有机物都可用HPLC法分析。第6页，共37页，星期日，2025年，2月5日*分析成本高，宜引起污染。缺少高灵敏度的通用型检测器。不能替代GC完成沸程范围宽的石油产品的分析。操作较GC复杂。HPLC的局限性第7页，共37页，星期日，2025年，2月5日*实际应用中，凡是能用GC分析的样品一般不用HPLC，因为GC更快，更灵敏，更方便，且耗费较低。HPLC与GC比较气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质几乎可分析各种物质不能用于热不稳定物质的分析可用于热不稳定物质的分析毛细管色谱可得到很高的柱效色谱柱不能很长、柱效不会很高有很灵敏检测器和较灵敏的通用检测器没有较灵敏的通用检测器流动相为气体，无毒、易于处理流动相有毒、费用较高运行和操作容易运行和操作较气相难仪器制造难度较小仪器制造难度较大第8页，共37页，星期日，2025年，2月5日**三、流程及主要部件高效液相色谱仪的主要部件：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。工作流程第9页，共37页，星期日，2025年，2月5日**一、储液罐及流动相的脱气1.储液罐溶剂在放人储液罐之前必须经过0.45μm滤膜过滤：除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。储液罐的材料应耐腐蚀：常用玻璃、氟塑料或PEEK塑料，容积约为0.5~2.0L。储液罐放置位置要高于泵体：以保持一定的输液静压差。使用过程储液罐应密闭：防溶剂蒸发引起流动相组成变化，还可防止空气中O2、CO2重新溶于已脱气的流动相中。第10页，共37页，星期日，2025年，2月5日**2．流动相脱气除去其中溶解气体，防止流动相由柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡，而增加基线噪声。使用荧光检测器，溶解在流动相中的氧气，会造成荧光猝灭。还会导致样品中某些组分被氧化或会使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。流动相在使用前必须进行脱气处理第11页，共37页，星期日，2025年，2月5日**吹氦脱气法，在0.1MPa下，以约60mL/min流速通入流动相10~15min。此法适用于所有的溶剂，脱气效果较好，但价格较贵。加热回流法，此法的脱气效果较好。抽真空脱气法，用微型真空泵除去溶解气体，降压至0.05~0.70MPa。超声波脱气法，流动相置放于超声波清洗器中，用超声波振荡10~15min。脱气效果最差。在线真空脱气法，真空脱气装置串接到储液系统中，使流动相进入输液泵前连续真空脱气。此法脱气效果最好，适于多元溶剂体系。常用的脱气方法第12页，共37页，星期日，2025年，2月5日**第13页，共37页，星期日，2025年，2月5日**二、高压输液泵1.高压泵性能有足够的输出压力：压力范围250~400kg/cm2。输出流量恒定：流量精密度应在1%，无脉动。流量范围宽：分析仪器应在0.1~10.0ml/min。制备仪器1~100ml/min。抗溶剂的腐蚀：常用不锈钢和PEEK塑料。泵死体积要小；以便迅速更换溶剂和梯度洗提。第14页，共37页，星期日，2025年，2月5日**2.高压泵分类：恒流泵：输出流量恒定，与柱引起阻力无关。恒压泵：输出压力恒定，与柱引起阻力无关。(1)恒流泵：常用往复式柱塞泵和注