血清谷丙转氨酶测定.pptVIP

*凡具有酮基的化合物均可与2，4-二硝基苯肼发生上述类似反应生成相应的苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标线时，需加入一定量的底物（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。而且加入梯度设计为从高到低的梯度，一方面是由于这是一个耗2，4-二硝基苯肼的物质；另一方面如果从低到高，则其影响效应与丙酮酸梯度相一致，这就无法令人信服地说明测出的结果就是丙酮酸所为。

血清中谷丙转氨酶的活力测定【目的要求】0101020304掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。020304原理转氨作用：将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。谷丙转氨酶glutamic-pyruvictransminaseGPT谷草转氨酶glutamicoxaloacetictransaminaseGOT当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿1胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷2丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因3此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的4参考价值。5本试验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。反应过程如下：60COOHCOCH3NO2H2NHNNO2COOHCCH3NO2NHNNO2+丙酮酸-2，4-二硝基苯腙棕红色，520nm处具特征光吸收，颜色深浅（OD520值）与丙酮酸含量成正比，可据此进行比色测定。2，4-二硝基苯肼COOHCNH2CH3COOHCO(CH2)2COOHCOOHCOCH3COOHCNH2(CH2)2COOH++谷丙转氨酶AlaGluα-KG丙酮酸King氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37℃与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清计算，因此实际侧得结果乘1000即可。实验材料及试剂实验材料：动物或人血清实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；四、实验操作标准曲线的绘制试剂管号012345丙酮酸标准液，ml基质液溶液，ml磷酸缓冲液，ml相当于酶活力卡门氏单位0.000.500.1000.050.450.10280.100.400.10570.150.350.10970.200.300.101500.250.250.102002,4-二硝基苯肼ml0.500.500.500.500.500.5037℃水浴保温20min氢氧化钠ml5.05.05.05.05.05.0室温下静置10min0号管调零，于520nm处测吸光度*凡具有酮基的化合物均可与2，4-二硝基苯肼发生上述类似反应生成相应的苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作标线时，需加入一定量的底物（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。而且加入梯度设计为从高到低的梯度，一方面是由于这是一个耗2，4-二硝基苯肼的物质；另一方面如果从低到高，则其影响效应与丙酮酸梯度相一致，这就无法令人信服地说明测出的结果就是丙酮酸所为。