TCVMA 179-2024 猫白血病病毒核酸检测方法.docx

ICS11.220

CCSB41

团 体 标 准

T/CVMA179—2024

猫白血病病毒核酸检测方法

Nucleicaciddetectionmethodoffelineleukemiavirus

2024-9-9发布 2024-9-9实施

中国兽医协会 发布

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前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件主要起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、上海基灵生物科技有限公司、东莞博盛生物科技有限公司、北京市动物疫病预防控制中心、北京动物园管理处、山东省动物疫病预防与控制中心、潍坊市动物疫病预防控制中心、上海市动物疫病预防控制中心、广州源博医药科技有限公司、天津农垦康嘉生态养殖有限公司。

本文件主要起草人：梁瑞英、梁琳、汤新明、丁家波、朱旭、王弋、刘昕、张启龙、贾婷、金红岩、刘存、刘砚涵、孙燕、赵洪进、赖强。

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6.1 样品采集、保存与运输6.1.1 使用含ETDA

6.1 样品采集、保存与运输

6.1.1 使用含ETDA抗凝剂的采血管，从临床疑似病例猫的前肢皮下头静脉或后肢的股静脉或耳缘静

脉采集200~300μL血液。样品编号并填写相应采样单，样品尽快送检，送检时添加冰袋，保持低温。

6.1.2 用于病毒核酸检测的样品应尽快送检，可在24h之内检测的样本可置于4℃保存，24h内无法

检测的样本置于-70℃或以下保存，如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱保存。

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猫白血病病毒核酸检测方法

范围

本文件规定了猫白血病病毒核酸的PCR和荧光PCR的检测方法。本文件适用于猫白血病病毒感染猫的血液中病毒核酸检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB19489 实验室生物安全通用要求

GB/T27401 实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FeLV：猫白血病病毒（Felineleukaemiavirus）

RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）TAE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷_乙酸_乙二胺四乙酸（TrisAcetate-EDTAbuffer）TBE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷_硼酸_乙二胺四乙酸（Tris-Borate-EDTAbuffer）Taq酶：耐热DNA聚合酶（ThermusAquaticusPolymerase）

仪器和试剂

仪器

PCR扩增仪。

4℃离心机。

分析天平。

生物安全柜。

微波炉。

电泳仪。

荧光定量PCR仪。

电泳槽。

紫外凝胶成像仪。

移液器（2.5μL、10μL、100μL、1000μL）。

耗材

称量纸。

量筒。

锥形瓶。

一次性无RNase枪头（2.5μL、10μL、100μL、1000μL）。

无RNase离心管（1.5mL）。

荧光定量PCR扩增仪配套的PCR管（0.2mL）。

离心管（1.5mL、200μL）。

移液器吸头（2.5μL、10μL、100μL）。

试剂

RNA提取试剂。

TAE电泳缓冲液：配方见附录A.1。

TBE电泳缓冲液：配方见附录A.2。

引物及探针序列，见附录B.1和C.1。

PCR阳性对照质粒序列、荧光PCR阳性对照质粒序列及制备，见附录D.1、D.2和D.3。

检测方法

样品处理

将6.1.1采集的肛拭子或粪便保存液，4℃，2000g离心10min，取200μL上清液进行核酸提取。

核酸提取

提取样品总RNA，可采用本标准推荐的方法，或选择商业试剂盒，按照试剂说明进行。

取200μL样品加入1mLTrizol裂解液，剧烈振荡30s，静置5min。

每个样品管