TCVMA 204-2024 猪非典型瘟病毒病诊断技术.docx

ICS11.220

CCSB41

团 体 标 准

T/CVMA204—2024

猪非典型瘟病毒病诊断技术

Diagnostictechniqueofatypicalporcinepestivirusdisease

2024–12-4发布 2024-12-4实施

中国兽医协会 发布

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前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由青岛市动物疫病预防控制中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：青岛市动物疫病预防控制中心、青岛农业大学、青岛博霖生物科技有限公司、新光瑞合（青岛）生物科技有限公司。

本文件主要起草人：李彦、赵永达、郭莉莉、杨胜男、段笑笑、尹斐斐、马帅、邴啟政、刘枢清、江强世、柳妍玲、曹志、付来宇、厉博雅、王守杰。

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猪非典型瘟病毒病诊断技术

范围

本文件规定了猪非典型瘟病毒临床诊断、RT-PCR、荧光RT-PCR及ELISA抗体检测方法的技术要求。本文件适用于猪非典型瘟病毒流行病学调查、诊断、检疫及病原鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB19489 实验室生物安全通用要求

GB/T27401 实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

APPV：猪非典型瘟病毒（atypicalporcinepestivirus）PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsalinebuffer)PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（Reversetranscription-polymerasechainreaction）

荧光RT-PCR：反转录-荧光定量聚合酶链式反应（QuantitativereversetranscriptionPCR）

临床诊断

病原学

猪非典型瘟病毒（APPV）主要感染猪。病原学为：APPV属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属

（Pestivirus），为单股正链RNA病毒。APPV基因组全长11~12kb（11475bp、11526bp），包括5-UTR和3-UTR非编码区及1个多聚蛋白阅读框。根据必威体育精装版的进化趋势，国际病毒分类委员会于2017年发布的分类指南中，将瘟病毒属划分为11个分支（A-K），而APPV为瘟病毒属K（PestivirusK）的代表毒株。

临床症状

该病主要发生于新生仔猪，以四肢、头部或全身出现有节奏的震颤为临床特征，成年猪多呈隐性感染，发病仔猪的死亡率高。该病具有传染性和遗传性。

仔猪均有不同程度的颤抖现象，且消瘦、行动迟缓，无法吸吮乳汁，但无瘫痪，发病率60％左右，死亡率超过60%。

部分未死亡的仔猪转到保育栏仍有颤抖，持续约2个月逐渐平稳。

剖检病变

病死猪喉头出血，肾脏点状出血，大部分病死猪的肠系膜淋巴结呈乳白色；其他组织器官无明显病理变化。

结果判定

出现5.2、5.3的情况，初步判定为猪非典型瘟病毒临床疑似病例，需要进一步开展实验室诊断。

样品采集、保存、运输和处理

组织样品采集

无菌采集病死猪脏器组织（如颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脑、心、肝、脾、肺、肾等），装入无菌采样袋或一次性灭菌的15mL或50mL离心管并编号；或采集疑似感染病猪的血液并编号。

保存和运输

样品采集后应冷链运输，并于24h内送达实验室。样品应尽快处理，在2℃~8℃保存宜不宜超

过24h；如超过24h需冷冻保存。如无法冷链运输，应将样品置于含10%甘油的平衡盐溶液（配制方法按照附录A中A.1）中运输。

样品处理

组织样品处理

猪的脏器组织（如颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脑、心、肝、脾、肺、肾等），剪碎、研磨或匀浆，按1g组织加10mLDEPC水（配制方法按照A.2）的比例配成