质粒DNA的提取及浓度检测.pptVIP

注意：用移液器操作时，每一步都要格外小心，特别是在加入溶液II和III后，一定不要剧烈振荡，以免切碎DNA(包括质粒DNA和基因组DNA)！！！培养细菌：将带有质粒的大肠杆菌接种到1.5-3ml含有相应抗生素的液体培养基，37℃培养12～16小时;取液体培养液1.5-3ml于Eppendorf管中，10000r/min离心1min，去掉上清液，加入100?l溶液1(GET)，充分混匀放置3-5分钟;加入200?l新配制的0.2mol/LNaOH+1％SDS（变性液），加盖颠倒6-7次使之混匀，冰上放置5min;质粒小量提取的方法（手工提取）：加入150?l乙酸钾溶液(溶液II)，加盖后颠倒6-7次混匀，冰上放置5min;用台式高速离心机，10000r/min离心7min，上清移入另一干净离心管，并加1ml100％乙醇混匀，12000r/min离心5min，弃去上清液;沉淀用0.5ml70％乙醇清洗一次，12000r/min离心5min，弃去上清液，小管倒置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然干燥;加入30-50?l含有20?g/mlRNase的灭菌蒸馏水或TE缓冲液溶解提取物，室温放置15-30min，使DNA充分溶解(有时需要酚:氯仿抽提);将分离出的质粒DNA置于-20℃保存备用。分子生物学实验任课教师:张淑平李英姿助教博士生:李颖华黄波唐颖课程基本情况简介/质粒DNA提取基本技术核酸的分离纯化(IsolationandPurificationofDNAandRNA)；电泳技术(GelElectrophoresis)；基因重组、亚克隆及表达（GeneRecombination,SubcloningandExpression)；PCR技术(PolymeraseChainReaction)；分子杂交及互作(MolecularHybridizationandInteraction)；DNA测序技术(DNASequencing)；基因功能的研究技术(GeneFunction)；基因的染色体定位（LocalizationofGenetoChromosomes）生物芯片技术（Bio-ChipsorBioarray)……..以完整、常用、重要为原则，经典与先进技术相结合，同时介绍相关知识，尽量让学生在有限的学时内掌握更多的分子生物学技术以及相关的知识。我们的分子生物学实验课程的设计从整体上可以说是一个完整的大实验，因为自始至终，各实验之间相互连贯，要求学生每一次实验既得到本次实验的结果，同时也为下一次更深入的实验做准备（提供实验材料）。0102课程基本情况：实验安排与实验报告次序实验名称周次学时备注1课程基本情况简介/质粒DNA提取36.02质粒DNA酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳45.03聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA56.04DNA回收纯化及重组体的构建66.55大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化及克隆筛选76.56重组克隆的鉴定87.07植物总RNA的提取与电泳95.08核酸转膜、探针标记105.09核酸杂交124.510综合测验、实验讨论与总结134.0注：实验报告分为1－2、3、4(实验6的设计)、4－5、6、7、8－9、10(6)重组克隆的鉴定实验的几点说明手工提取质粒方法将在“实验一”中讲到，“实验六”上课时间将提前到下午1:00；接种培养将在“重组克隆的鉴定”实验课的前一天的晚上进行（7:30-9:00pm?9:00-10:20?）；助博将准备好试管LB培养基，用前别忘了加你需要的抗生素;提供的酶包括EcoRI,XhoI,BamHI,HindIII,XbaI。自己选择正确的酶使用。。实验方案由学生自己设计！要提前进行。(目的意义、材料和方法、结果及讨论)以下几点请注意：01认真预习实验指导；03节约实验试剂及材料；05按时、按质、按量完成实验工作，不迟到，不早退；02按照操作规程使用仪器设备,注意个人以及公共设施安全；0