动物克隆胚胎的激活职业教育医学生物技术专业教学课件.pptx

职业教育医学生物技术专业教学资源库动物克隆胚胎的激活

职业教育医学生物技术专业教学资源库克隆胚胎的激活是体细胞克隆技术的关键环节。体细胞克隆胚胎的充分激活是保证胚胎正常发育的先决条件，只有在去核卵母细胞充分激活的情况下才可以指导移入的核发生重编程。目前对克隆胚胎的激活方法有电激活、化学激活和电刺激结合化学激活。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.1电激活电刺激可产生显著的跨膜Ca2+内流。一般认为短而高的直流电脉冲可导致真核生物质膜脂双层不稳定。这种可逆的不稳定使得质膜瞬间产生小孔洞，便于细胞内外离子和大分子的交换。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.1电激活孔洞的大小受质膜电位变化、脉冲时程、培养液离子强度以及细胞类型等多个因素影响。在细胞外Ca2+存在时，电穿孔可在多种动物上诱导卵母细胞活化。如兔卵被刺激激活的效果取决于操作液中Ca2+的有无。这表明是Ca2+内流而非电刺激本身具有直接的激活作用。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.1电激活根据在核移植前或核移植后进行激活而分为融合前激活、融合激活和融合后激活。融合前激活，获得的卵母细胞是万能受体，即供体细胞不需要同期化，处于任何细胞周期的供体核移入该卵母细胞质中都有发育为成活个体的潜能。首例体细胞克隆山羊就是通过这种方案取得成功的。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.1电激活融合同时激活和融合后激活是最常采用的激活方法，尤其是融合后激活法，可以使供体核与卵胞质充分的相互作用，有利于供体核的重编程。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.2化学激活常用克隆胚胎的化学激活物质有乙醇、离子霉素、钙离子载体、放线菌酮和6-DMAP（6-二甲氨基嘌呤）。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.2化学激活例如7%乙醇，把需激活的重组卵放入含7%乙醇的培养液中，在37℃、CO2培养箱中处理5min或室温下处理7min,洗净后进行培养。离子霉素(ionomycin),使用浓度为5mol/L,处理时间为4～5min；6-DMAP，使用浓度为1.9～2mmol/L,处理时间为3～5h或更长。

职业教育医学生物技术专业教学资源库2.3电激活结合化学刺激首先以电刺激激活重构胚胎，然后再放入含放线菌酮的培养液滴培养一段时间，进一步维持MPF（促成熟因子）活性处于低水平。为了减少重编程期间对供体核染色体的过度作用，放线菌酮的作用时间一般是3～5h,之后将克隆胚胎放入不含放线菌酮的相同培养液滴中培养。

职业教育医学生物技术专业教学资源库克隆胚胎的激活是哺乳动物体细胞克隆成功的关键环节之一。上述的激活方案中最为常用的是电刺激诱导融合，在融合的同时往往就完成了激活，而且电激活法比较简单，容易操作。但化学激活的应用使克隆的效率得到显著提高。

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