2025年高考生物答题技巧与模板构建题型05 生物技术与功能类(3大模板）（原卷版）.docx

题型05生物技术与功能类

模板01利用PCR技术获取目的基因模板02利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式

模板01利用PCR技术获取目的基因

模板02利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式

模板03利用PCR技术引导基因定点突变

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常见设问/关键词

微生物的基本培养技术

2023·全国乙·T372022·天津·T32021·天津·T1

设问关键词：常规PCR、重叠延伸PCR、荧光定量PCR

发酵工程的原理及应用

2023·山东·T202022·湖北·T132022·山东·T20

基因工程的基本工具

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基因工程的应用

2022·河北·T242022·广东·T222022·全国乙·T382021·河北·T24

动物细胞融合和单克隆抗体的制备

2023·北京·T12023·湖北·T222022·山东·T152022·福建·T13

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植物细胞工程的应用

2023·山东·T14

几种不同PCR的应用

2023·江苏·T222023·山东·T252022·江苏·T242022·山东·T25

2021·全国甲·T382021·山东·T252020·北京·T122020·江苏·T33

命题预测

PCR技术是近年高考热点，常涉及对PCR基本过程、引物的选择、多种PCR的应用

关键技巧

掌握PCR过程的基本原理

模板01利用PCR技术获取目的基因

获取目的基因是基因工程操作的第一步。获取目的基因的方法有多种，现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因。PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。该技术由穆里斯等人于1985年发明，为此，穆里斯于1993年获得了诺贝尔化学奖。

技巧01利用PCR技术获取目的基因

1．（2024·河南·模拟预测）数字PCR技术被称为第三代PCR,在核酸定量检测中具有突出优势。该技术通过将一个样本稀释分成几十至几万份，并分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板)，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析，计算初始样品中靶标分子的拷贝数。据此分析，下列说法正确的是（）

A．数字PCR技术仅适用于样本中目标分子含量较高的材料

B．数字PCR技术遵循的基本原理是DNA的边解旋边复制

C．每个单元中加入等量的4种核糖核苷酸溶液作为扩增原料

D．每个单元中目标分子的两条子链合成都是从5端向3端延伸

【答案】D

【思路详解】A、数字PCR技术把检测样本稀释后分配到不同的反应单元，在每个单元进行一个或多个目标分子扩增，再对每个单元的扩增结果综合分析，计算初始样品中靶标分子的拷贝数。该技术对高、中、低水平的目标分子含量的材料均可实现正确、精密的测定，A错误；

B、数字PCR技术遵循的基本原理是DNA半保留复制，B错误；

CD、每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，需要加入4种脱氧核苷酸的等量混合液、与目标分子特异性结合的两种引物和TaqDNA聚合酶等，两条子链合成是从两种引物的3端开始连接脱氧核苷酸，C错误、D正确。

（2024·安徽芜湖·二模）不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA（ssDNA）的方法。加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物。PCR反应最初的若干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），但当限制性引物消耗完后，就会产生大量的ssDNA。不对称PCR的简单过程如图所示。假设模板DNA分子初始数量为a个，6次循环后开始扩增产生ssDNA。下列有关叙述错误的是（????）

A．限制性引物和非限制性引物均可与模板DNA单链结合

B．不对称PCR循环6次需要消耗（26-1）a个限制性引物

C．最后获得的ssDNA中不含非限制性引物

D．子链的延伸都是从两种引物的3端开始的

模板02利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式

检测目的基因在受体细胞内是否稳定存在是基因工程操作的重要步骤，可以借助载体上的标记基因、PCR技术和核酸分子杂交技术等方法鉴定受体细胞中是否转入了目的基因。在实际操作中，PCR技术不仅可以精准地鉴定受体细胞是否转入目的基因，还可以通过引物的巧妙设计鉴定目的基因的连接方式。

【补充】利用P