病毒与细胞的相互作用.ppt

能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%组织细胞感染量（TCID50）第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日（二）空斑试验plaqueassay细胞单层接种病毒后再覆盖一层含营养液的琼脂层。这样病毒自然感染释放后不能悬浮于液体中，只能感染邻近与之接触的细胞，以致感染区由原始病灶向四周扩大，形成类似细菌的菌落，此即空斑试验。第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日关于病毒与细胞的相互作用第1页，共46页，星期日，2025年，2月5日第四章病毒与细胞间的相互作用第一节病毒的细胞培养第二节病毒与细胞的相互作用第2页，共46页，星期日，2025年，2月5日第一节病毒的细胞培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。第3页，共46页，星期日，2025年，2月5日一、动物接种接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。第4页，共46页，星期日，2025年，2月5日动物接种的优缺点：优点：（1）不需要复杂的仪器设备；（2）技术简单；（3）易成功缺点：（1）个体差异大（2）价格昂贵（3）数量有限（4）需要隔离畜舍第5页，共46页，星期日，2025年，2月5日二、鸡胚接种一种比较经济简便的方法。卵壳壳膜第6页，共46页，星期日，2025年，2月5日接种途径绒毛尿囊膜接种9-13日龄

尿囊腔接种9-10日龄卵黄囊接种6-8日龄羊膜腔接种10日龄脑内接种10日龄第7页，共46页，星期日，2025年，2月5日1气室2卵壳3卵黄囊4卵白5尿囊腔6绒毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8页，共46页，星期日，2025年，2月5日第9页，共46页，星期日，2025年，2月5日第10页，共46页，星期日，2025年，2月5日鸡胚接种的优缺点：优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。第11页，共46页，星期日，2025年，2月5日细胞培养(cellculture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。三、细胞培养第12页，共46页，星期日，2025年，2月5日每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等无个体差异，准确性和重复性好可严格执行无菌操作细胞培养本身就能显示病毒的生长特征应用空斑技术可进行病毒的克隆化优点：第13页，共46页，星期日，2025年，2月5日根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型：原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。（一）细胞的类型第14页，共46页，星期日，2025年，2月5日（二）细胞培养的方法静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。悬浮培养微载体培养：悬浮、微载体第15页，共46页，星期日，2025年，2月5日第二节病毒与细胞的相互作用杀细胞感染非杀细胞感染引致持续感染，对细胞代谢无影响。RNA干扰产生干扰素第16页，共46页，星期日，2025年，2月5日生产性感染（productive）：病毒感染后能产生完整的子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化。非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染（abortiveinfection）:病毒感染后不形成完整的病毒颗粒。持续性感染（persistentinfection）:持续长时间的感染，