T_CIFST 020-2024 食品用菌种检验 鼠李糖乳酪杆菌检验PMA-qPCR法.docxVIP

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团体标准

T/CIFST020—2024

食品用菌种检验鼠李糖乳酪杆菌检验PMA-qpcR法

ExaminationofmicrobialfoodcultureDetectionofLacticaseibacillusrhamnosusPMAqpcRmethod

2024-04-01发布2024-04-01实施

中国食品科学技术学会发布

T/CIFST020—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规

则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国食品科学技术学会提出并归口。

本文件起草单位:中国食品发酵工业研究院有限公司、国家食品安全风险评估中心、汤臣倍健股份有限公司、山西大学、发酵行业生产力促进中心、丹尼斯克(中国)有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司、光明乳业股份有限公司、北京科拓恒通生物技术股份有限公司、微康益生菌(苏州)股份有限公司。

本文件主要起草人:姚粟、郭立峥、徐进、赵溪、迮晓雷、张国华、刘艺茹、冯会粉、葛媛媛、郭茸凯、路春霞、马霞、王玉琼、张旭光、毛跃建、张锋华、马杰、方曙光、夏九学。

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T/CIFST020—2024

食品用菌种检验鼠李糖乳酪杆菌检验PMA-qPCR法

1范围

本文件规定了食品中鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillusrhamnosus)的PMA-qPCR检验方法。本文件适用于食品原料和固体饮料中鼠李糖乳酪杆菌的活菌定量检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB4789.35—2023食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语、定义和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1.1

实时荧光定量PCRquantitativereal-timepolymerasechainreaction

在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,对未知模板DNA进行定量分析的方法。

3.1.2

Ct值cyclethresholdvalue

实时荧光定量PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CFU:菌落形成单位(colonyformingunits)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

LED:发光二极管(lightemittingdiode)OD:光密度(opticaldensity)

PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)PMA:叠氮溴化丙锭(propidiummonoazide)

qPCR:实时荧光定量PCR(quantitativereal-timepolymerasechainreaction)ROX:一种荧光染料(carboxy-X-rhodmine)

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4原理

PMA是一种能与DNA结合的光反应染料,可透过受损细胞膜与菌体DNA发生共价交联,从而抑制受损菌体DNA的qPCR扩增。样品经PMA染料处理、DNA提取后,采用鼠李糖乳酪杆菌特异性引物进行qPCR扩增。细胞膜结构完整的活菌菌体DNA在qPCR扩增反应中能够产生荧光信号。当扩增产物的荧光信号达到设定阈值时,可被实时检测并生成Ct值,将Ct值代入标准曲线方程中,计算获得样品中鼠李糖乳酪杆菌的活菌数量。

5仪器设备

5.1实时荧光定量P