常用的离心方法聊城王辅明课件.pptx

职业教育医学生物技术专业教学资源库常用的离心方法聊城职业技术学院王辅明

常用的离心方法一、差速离心法差速离心法是利用不同的粒子在离心力场中沉降系数的差别，在同一离心条件下，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分步沉淀的离心方法。主要用于一般及特殊样品的分离，例如分离细胞器和病毒。

常用的离心方法操作过程一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开，然后将上清液加高转速离心，分离出第二部分沉淀，如此反复加高转速，逐级分离出所需要的物质（如左图所示）。图差速离心示意图

常用的离心方法差速离心法的优缺点优点缺点1.操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开;2.可使用容量较大的角式转子；分离时间短、重复性高；3.样品处理量大。1.分辨率有限、分离效果差，不能一次得到纯颗粒；2.壁效应严重，容易使颗粒变形、聚集而失活。对分离纯度要求较高的样品应用此法，容易造成被分离物的大量丢失，变性以及造成污染，尤其对于一些沉降系数相差不太大的组份要获得完全的分离提纯比较困难，所以该离心方法常用于要求不严格样本的初步分离和大批量标本的处理，例如分离已破碎的细胞各组份等。

常用的离心方法二、密度梯度离心法又称为区带离心法样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力作用下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。

常用的离心方法密度梯度离心法的优缺点优点缺点1.分辨率高，分离效果好，可一次获得较纯颗粒；2.适用范围广，既能分离沉淀系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度的颗粒；3.颗粒不会积压变形，能保持其活性，并可防止已形成的区带由于对流而引起混合。1.离心时间较长；需要制备成梯度液；2.操作严格，不宜掌握。

常用的离心方法离心时先将样品溶液置于一个由梯度材料形成的密度梯度液中，离心后被分离组份以区带层分布于梯度液中。密度梯度离心法分为速速率区带离心法率区带离心法和等密度区带离心法。

常用的离心方法1.速率区带离心法

速率区带离心法是根据被分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，离心后分别处于不同的密度梯度层内形成几条分开的样品区带，达到彼此分离的方法。2.等密度区带离心法当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场中，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上（即等密度点）形成区带，故称为等密度区带离心法。

常用的离心方法操作中，一般是将被分离样品均匀分布于梯度液中，离心后，粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带，收集好所需区带即为纯化的组份。主要用于科研及实验室特殊方面的样品组份的分离和纯化。

常用的离心方法等密度区带离心法和速率区带离心法的比较方法相同点不同点等密度区带离心法预先制备分离液使梯度液的最大密度不超过样品在该梯度中的浮力密度，利用这类生物组份在尺寸上的差异形成的沉降速率的不同，选择某一特定离心时间，当它们中的各个纯样品区带之间的距离拉得最远时停止离心即可以达到分离目的。速率区带离心法是一种平衡离心法，利用被分离物的密度的差别而进行分离纯化，从梯度介质形成到样品颗粒形成等密度区带，与分离物的大小及形状无关。

常用的离心方法三种离心方法的特点方法不同点差速离心法根据样品组份的沉降系数不同进行分离速率区带离心法根据样品组份的沉降系数不同进行分离等密度区带离心法根据样品组份的密度不同进行分离

常用的离心方法三、分析性超速离心法分析性超速离心法主要是为了研究生物大分子的沉降特性和结构，而不是专门收集某一特定组份。因此它使用了特殊的透明离心池和光学检测方法，可连续监测物质在一个离心场中的沉降过程。

常用的离心方法分析性超速离心法的应用范围（1）测定生物大分子的相对分子重量测定相对分子重量中应用最广的是沉降速度法。用照相记录，求出粒子的沉降系数。

常用的离心方法（2）生物大分子的纯度估计用沉降速度的技术来分析沉降界面是测定制剂均质性的最常用方法之一，出现单一清晰的界面一般认为是均质的，如有杂质则在主峰的一侧或两侧出现小峰。

常用的离心方法（3）分析生物大分子中的构象变化生物大分子构象上的变化可以通过检查样品在沉降速度上的差异来证实。

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