项目四章动物细胞制药.pptVIP

动物细胞培养特征01贴壁依赖性细胞02非贴壁依赖性细胞03兼性贴壁依赖性细胞0423145上皮细胞型成纤维细胞型生长须有贴附的支持物表面,自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。两种形态：贴壁细胞1243悬浮细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。兼性贴壁细胞生长不严格依赖支持物。如中国仓鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。1234动物细胞培养技术原代培养：是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，是检测药物很好的实验对象。传代培养：将培养细胞从培养器中取出，把一部分移至新的培养器中再进行培养。原代培养形成的单层细胞汇合以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，都将影响细胞的生长。有限细胞系连续细胞系010302STEP03STEP04STEP01STEP02特点：细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需要抗生素；动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌；动物细胞培养的营养条件在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在，培养过程具有群体效应、锚地依赖性、接触抑制性及功能全能性；01培养过程产物分布于细胞内外，反应过程成本较高，但产品价格昂贵02大规模培养时，不可套用微生物反应的经验：03原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。04培养基组成天然培养基血清水解乳蛋白胚胎浸液等合成培养基氨基酸维生素糖无机盐等加10%-20%血清血清的优点？缺点？无血清培养基无毒无菌温度温度除直接影响到细胞生长外，与培养液的pH值也有关。如低温时可增加CO2的溶解性而影响pH。最理想的做法是把配有血清的培养液，置于36.5℃中。过夜，然后再用于培养。环境条件渗透压人类血浆的渗透压为770kPa，小鼠类则为820kPa。培养液的渗透压一般介于(690～850)kPa之间，能为多数细胞所耐受。气体环境与pH保存与运输保护剂：DMSO、甘油80度或（-196度）液氮大规模培养动物细胞生产生物制品大约始于本世纪50年代，Earle等开发出细胞培养基之后，主要是用于生产病毒疫苗。最初的生产方法是采用成百上千只体积小的培养瓶，后来又改用滚瓶培养。动物细胞大规模培养1967年，VanWezel开发了适合贴壁细胞生长的微载体，使得动物细胞的培养能够在搅拌釜式反应器中进行，大大提高了生产率。1972年，Knazek开发了中空纤维反应器，使得细胞密度大为提高。1975年，Koholor和Milstein创立了细胞融合技术，使得悬浮细胞的培养变得十分迫切，气升式反应器被应用于杂交瘤细胞的培养，以生产单克隆抗体。1978年，Lim还开发了细胞微囊化技术，将非贴壁依赖性细胞包含在较小的颗粒状微囊中，使培养在搅拌釜式或气升式反应器中进行，并放大至1000L规模。模块二、操作技术细胞融合细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。细胞融合的意义

理论上说任何细胞，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。细胞准备杂种细胞选择如HAT培养基诱导融合杂种细胞克隆01030204融合的基本过程促融剂：病毒：促使细胞融合的主要步骤如下：两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。用灭活的病毒诱导的动物细胞融合过程示意图HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG诱导:聚乙二醇(PEG)结构为：聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。?项目四

细胞工程制药技术主要内容：细胞培养细胞融合、重