食品中大肠菌群的测定.ppt

（1）选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1mL。同时分别取1mL生理盐水加入两个无菌平皿作空白对照。（2）及时将15mL-20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL-4mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±l℃培养18h-24h。2、平板计数第31页，共62页，星期日，2025年，2月5日?（3）平板菌落数的选择选取菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。

2、平板计数第32页，共62页，星期日，2025年，2月5日?（4）、证实试验

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h-48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

2、平板计数第33页，共62页，星期日，2025年，2月5日?（5）大肠菌群平板计数的报告

经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。2、平板计数第34页，共62页，星期日，2025年，2月5日例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。第35页，共62页，星期日，2025年，2月5日国标4789.3的08版与03版主要不同1、名称更改以大肠菌群计数代替原来的大肠菌群测定。2、增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法。3、大肠菌群的MPN法以乳糖为主改为以月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤为主的要培养基的MPN法。4、大肠菌群的MPN法中原“报告每100ml（或g）大肠菌群的MPN值”改为“报告每1ml（或1g）大肠菌群的MPN值”。第36页，共62页，星期日，2025年，2月5日比较区别GB/T4789.38--2008大肠杆菌的计数第37页，共62页，星期日，2025年，2月5日03版??流程

第38页，共62页，星期日，2025年，2月5日第39页，共62页，星期日，2025年，2月5日一、??步骤取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成1:10的均匀稀释液为检样。第40页，共62页，星期日，2025年，2月5日同一稀释度在做菌落总数测定的同时接种乳糖胆盐发酵管，并且用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照。第41页，共62页，星期日，2025年，2月5日1、乳糖发酵试验

根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。第42页，共62页，星期日，2025年，2月5日接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。第43页，共62页，星期日，2025年，2月5日置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。

第44页，共62页，星期日，2025年，2月5日关于食品中大肠菌群的测定第1页，共62页，星期日，2025年，2月5日1、??了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌群测定在食品卫生检验中的意义。??2、练习并掌握大肠菌群的检验方法?。一、?目的第2页，共62页，星期日，2025年，2月5日二、原理1、大肠菌群大肠菌群系指一群在37℃、24小时能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。第3页，共62页，星期日，2025年，2月5日主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的Ⅲ亚属细菌组成。第4页，共62页，星期日，2025年，2月5日该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。食品中大肠菌群数系以每1g（或mL）检样内大肠菌群最可能数MPN（the?most?probable?number-简称MPN）表示2、测定的意义第5页，共62页，星期日，2025年，2月5日3大肠杆菌的生