诊断用制品制造技术.pptVIP

取5mgHRP溶于1.0ml新配制的0.3mo1pH8.2的NaHCO3，溶液中。滴加0.1mll%2,4二硝基氟苯（FDNB）无水乙醇溶液，室温避光轻轻搅拌1h。③加入1.0m10.06M过碘酸钠（NaIO4）水溶液，室温轻搅30min。标记步骤：01加入lml0.16M乙二醇，室温避光轻搅，然后装人透析袋中。02于1000mlpH9.50.01M碳酸钠缓冲液中，4?C透析过夜，其间换液3次。03吸出透析袋中液体，加入每毫升含IgG5mg的pH9.50.01M碳酸钠缓冲液1m1，室温避光轻轻搅拌2-3h。04加硼氢化钠（NaBH4）5mg，置4℃3h或过夜。标记步骤：逐滴加入等量饱和硫酸铵溶液，置4℃1h后，4000r/min离心15min，弃上清，沉淀。再用50%饱和硫酸铵沉淀2次。⑨沉淀物溶于少量pH7.40.01M磷酸缓冲盐水液，装人透析袋，以同样缓冲盐水液充分透析至无铵离子，l0000rpm离心30min，上清液即为酶标记抗体。01该类制剂主要用于ELISA试验。02标记步骤：目前多使用同位素碘作标记。125I半衰期较长（60d）、同位素丰度大、辐射损伤小和计数率较高。先将提纯的免疫抗体IgG与同位素125I置试管中，再加入氯胺T。由于碘化反应进行很快，故碘及氯胺T必须在搅拌下加入，以免碘化不均匀，约5min后加入还原剂偏重亚硫酸钠，阻断氯胺T作用以终止碘化反应，再加入碘化钾作为碘离子的载体，以减少蛋白分子吸附试剂中数量不稳定的放射性碘离子。最后用过葡聚糖G-50柱等方法将游离碘及其他放射性杂质与标记抗体分开。该类标记抗体可用于检测相应的抗原。（三）放射性同位素标记抗体技术概述01治疗用生物制品是指用于治疗动物传染病的制品。一般是利用微生物及其代谢产物等作为免疫原，经反复多次注射同一动物体，所生产的一类含高效价抗体，主要包括高度免疫血清、卵黄抗体和牛奶抗体等。02高度免疫血清简称“高免血清”（hyperimmuneserum），又称免疫血清（immuneserum）或抗血清（antiserum）。可分为抗病血清和抗毒素两类。该类制剂治疗或预防某些相应的疾病，具有很高的特异性。也用作被动免疫，紧急预防和治疗相应传染病。03第六节治疗用生物制品制造技术含有特异性的免疫球蛋白—抗体输入动物体后，动物即可被动地获得了抗体，从而形成免疫力，即所谓的人工被动免疫。当动物己感染某种病原微生物发生传染病时，注射大量的抗病血清后，由于抗体的作用，可抑制动物体内的病原体继续繁殖，并协助体内正常防御机能，消灭病原微生物，使病畜逐渐恢复健康。该作用具有很强的特异性，一种血清只对相应的一种病原微生物或毒素起作用。（一）作用机理STEP2STEP1用作紧急预防注射，通常是在已经发生传染病或受到传染病威胁的情况下使用，其优点是注射后立即产生免疫。但是这种免疫力维持时间较短，一般仅2～3周，因此，在注射血清后2～3周仍需再注射一次疫苗，才能获得较长时间的抗传染能力。（二）应用01抗炭疽血清、破伤风抗毒素、02抗羔羊痢疾血清、抗气肿疽血清、03抗猪瘟血清、抗小鹅瘟血清、04抗传染性法氏囊病血清；05抗犬瘟热血清等，06其中，破伤风抗毒素血清的效果最佳，应用最广。举例制造高免血清用动物的选择与管理动物的选择动物的品种用于制备免疫血清的动物有马、牛、山羊、绵羊、猪、兔、犬、鸡和鹅等。制备抗菌和抗毒素血清多用异种动物，通常用马和牛等大动物制备。如破伤风抗毒素多用青年马制备，抗猪丹毒血清多用牛制备。抗病毒血清的制备多用同种动物，如犬瘟热血清用犬制备，抗猪瘟血清用猪制备。总的来看，制备免疫血清用马较多，因为血清渗出率较高，外观颜色较好。也可使用多种动物制备一种抗毒素血清，以避免发生过敏反应或血清病。选定动物应有一定的数量，一个批次应用多头动物。通常选择体型较大、性情温驯、体质强健的青壮年动物为宜。马以年龄3～8岁、体重350kg以上者为宜；牛以3～10岁、体重300～400kg以上为宜；猪以50kg以上，年龄6～12月龄为宜；家免体重需达2kg以上为好。12对某些购进动物进行必要的和对制备抗血清无影响的预防免疫接种。3供制造免疫血清的动物，必须从非疫区选购，经过严格检疫,并经隔离观察，每日测温两次，观察二周以上，确认健康者方可应用。最好自繁自养动物，或由专门饲养场提供标准化的SPF或其他级别的动物。2.动物的年龄及健康情况符合要求的动物：动物应在隔离条件下饲养，杜绝高免时强毒及发病时散毒。应详细登记每头动物的来源、品种、性别、年龄、体重、特征及营养状况、体温记录和检疫