微生物的培养技术及应用(第3课时)课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第2节微生物的培养技术及应用

二、微生物的选择培养和计数

1.选择培养基

资料一：1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应（PCR）。

水生栖热菌生长温度为60～80℃，最适生长温度为70～72℃，可以在高温环境中生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。

思考一：筛选水生栖热菌的思路是什么样的？

思考二：为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？

寻找目的菌种时要根据它对生存环境的特殊要求，到相应的环境中去寻找。

二、微生物的选择培养和计数

1.选择培养基

类型

条件

分离得到的菌种

改变培养条件

添加某种化学物质

特殊碳氮源

营养缺陷

水生栖热菌

酵母菌、霉菌等真菌

金黄色葡萄球菌

石油分解菌

自养型微生物

固氮菌

二、微生物的选择培养和计数

1.选择培养基

（1）概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

（2）实例：

牛肉膏

蛋白胨

NaCl

琼脂

蒸馏水

5.0g

10.0g

5.0g

20.0g

定容到1000ml

KH2PO4

NaH2PO4

MgSO4·7H2O

葡萄糖

尿素CO(NH2)2

琼脂

蒸馏水

1.4g

2.1g

0.2g

10.0g

1.0g

15.0g

定容到1000ml

都属于固体培养基；

依据是添加了凝固剂琼脂；

培养基的主要用途是分离、鉴定、计数、保存。

2.从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？

培养基二属于选择培养基；其可获得能分解尿素的微生物。

牛肉膏

蛋白胨

NaCl

琼脂

蒸馏水

5.0g

10.0g

5.0g

20.0g

定容到1000ml

KH2PO4

NaH2PO4

MgSO4·7H2O

葡萄糖

尿素CO(NH2)2

琼脂

蒸馏水

1.4g

2.1g

0.2g

10.0g

1.0g

15.0g

定容到1000ml

碳源、氮源、无机盐、水

牛肉膏、蛋白胨

牛肉膏、蛋白胨

葡萄糖

尿素

编号

①

②

③

④

⑤

成分

(NH4)2SO4

KH2PO4

FeSO4

CaCl2

H2O

含量

0.4g

4.0g

0.5g

0.5g

100mL

液体

没有凝固剂(琼脂)

选择

自养型

水、无机盐、氮源

碳源、氮源、生长因子

凝固剂(琼脂)

①

尿素

不含氮元素

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（1）方法：稀释涂布平板法

（2）原理：由于土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上。

以尿素作为唯一氮源

（3）两个基本操作：梯度稀释和涂布平板

稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

土壤取样

注意：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（4）操作过程：

土壤取样

1×102

稀释10倍菌液

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（4）操作过程：

土壤取样

①具体操作：将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。

利用移液枪，可以定量取得样液。

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（4）操作过程：

土壤取样

多做几组重复实验，以减小计数误差

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（4）操作过程：

土壤取样

二、微生物的选择培养和计数

2.微生物的选择培养

（4）操作过程：

土壤取样

①具体操作:待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。

例3.列表比较平板划线法与稀释涂布平板法的异同点：

方法

平板划线法

稀释涂布平板法

纯化原理

接种工具

单菌落的获得

用途

效果图

相同点

连续划线

梯度稀释→涂布平板

接种环

涂布器

从最后划线区挑取

稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落

分离纯化菌种，获得单菌落

①分离纯化菌种，获得单菌落

②用于计数

①都能分离纯化菌种；②都在固体培养基上进行

二、微生物的选择培养和计数

3.微生物的数量测定

（1）间接计数法：

②计数原则：

选择菌落数为的平板计数样品的将直接影响平板上的菌落数目。

同一稀释度下，应至少对个平板进行重复计数，然后求出。

30~300

3

平均值

稀释度

恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。

二、微生物的选择培养和计数

3.微生物的数量测定

（1）