《高效液相色谱分析》课件.ppt

高效液相色谱分析本课件将带您深入了解高效液相色谱分析(HPLC)的原理、应用和实际操作。

课程介绍：HPLC概述HPLC高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography)是一种强大的分析技术，广泛应用于化学、生物学、医药、食品和环境等领域。课程目标本课程旨在帮助您掌握HPLC的基本原理、操作方法和数据分析技能，并能够将HPLC应用于实际分析工作。

HPLC的原理分离原理HPLC基于样品组分在流动相和固定相之间分配系数的不同，实现对混合物的分离。流动相将样品带入色谱柱，固定相则对样品组分进行选择性吸附或分配。分配系数分配系数是指样品组分在固定相和流动相中的浓度比值，它是影响分离效果的关键因素。

HPLC的特点与优势1高分辨率HPLC能够分离结构极其相似的物质，提供高分辨率的结果。2灵敏度高HPLC具有很高的灵敏度，可以检测痕量物质。3应用广泛HPLC适用于分析多种类型的样品，包括有机化合物、无机化合物、生物大分子等。4操作简便现代HPLC仪器操作简便，自动化程度高。

HPLC的应用领域药物分析药物质量控制、新药研发食品安全食品添加剂、农药残留、真菌毒素检测环境监测污染物分析、水质监测生物技术蛋白质分离纯化、生物标志物分析

液相色谱仪的组成1流动相系统提供流动相，包括溶剂储液瓶、泵、梯度控制系统。2进样系统将样品注入色谱柱，包括手动进样器和自动进样器。3色谱柱进行分离的核心部件，包含固定相。4检测器检测被分离的样品组分，根据组分的特性选择不同的检测器。5数据处理系统采集、处理和分析色谱数据，包括色谱工作站。

流动相系统高压泵提供高压流动相，推动流动相通过色谱柱。梯度控制系统根据设定程序，控制流动相的组成，实现梯度洗脱。

进样系统手动进样通过手动操作进样阀，将样品注入色谱柱。自动进样通过自动进样器，自动进样，提高效率和精度。

色谱柱123固定相对样品进行选择性吸附或分配的物质，是色谱柱的核心。柱管盛装固定相的管体，通常由不锈钢制成。端盖固定固定相，防止其流失。

检测器UV利用样品对紫外光的吸收特性进行检测。DAD同时检测多个波长的紫外光吸收，获取样品更多信息。FLD利用样品的荧光特性进行检测。ECD利用样品在电极上的氧化还原反应进行检测。MS将样品离子化，根据质量电荷比进行检测。RID利用样品与流动相的折光率差异进行检测。

数据处理系统采集数据采集检测器输出的信号，生成色谱图。分析数据对色谱图进行分析，获得样品组分的定性定量信息。管理数据存储、管理和检索色谱数据。

流动相的选择原则1溶解性流动相能够完全溶解样品组分。2分离效果流动相与固定相的极性匹配，能够实现良好的分离效果。3兼容性流动相与色谱柱、检测器等设备兼容，不会造成损坏。4安全性流动相安全无毒，符合实验要求。

常用流动相溶剂名称缩写极性用途水H2O强极性反相色谱，生物样品分析甲醇MeOH中等极性反相色谱，大多数有机化合物乙腈ACN中等极性反相色谱，强疏水性物质四氢呋喃THF弱极性反相色谱，高沸点物质二氯甲烷DCM弱极性正相色谱，非极性物质

流动相的配制与处理准备选择合适的溶剂和比例，根据实验要求配制流动相。过滤使用0.45μm的滤膜过滤流动相，去除颗粒杂质。脱气去除流动相中的溶解气体，防止气泡影响分离。保存将配制好的流动相保存于合适的容器中，避免污染。

流动相的脱气方法超声脱气将流动相置于超声波清洗器中进行脱气。真空脱气将流动相置于真空条件下进行脱气。氦气脱气用氦气吹扫流动相进行脱气，适用于高灵敏度分析。

进样方式：手动进样操作步骤1.将样品溶液注入进样器。2.通过手动操作进样阀，将样品注入色谱柱。适用范围手动进样适用于样品量较少、分析频率较低的实验。

自动进样器的原理1样品定位自动进样器通过机械臂将样品瓶移至进样位置。2样品吸取进样针将样品溶液吸取到进样针中。3样品注入进样针将样品注入色谱柱。4清洗进样针和样品通路进行清洗，防止交叉污染。

进样体积的控制1进样针自动进样器使用精密进样针，控制进样体积。2程序控制根据设定程序，控制进样针的移动距离，实现不同体积的进样。3体积校正定期对进样体积进行校正，确保进样准确性。

色谱柱的分类：按固定相极性1反相色谱固定相为非极性，流动相为极性。2正相色谱固定相为极性，流动相为非极性。

色谱柱的分类：按柱内径

色谱柱的填料类型硅胶最常用的固定相填料，表面有大量的硅羟基，可以与多种物质相互作用。聚合物耐酸碱、耐高温，适用于分析强酸强碱性物质。其他包括氧化铝、碳、离子交换树脂等，根据具体的应用选择。

反相色谱柱1固定相C18、C8、C4等烷基键合硅胶，具有疏水性。2流动相水、甲醇、乙腈等极性溶剂。3应用分离大多数有机化合物，包括药物、农药、食品添加剂等。

正相色谱柱1固定相硅胶、氧化铝等