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花椒组织培养快繁技术规程

1范围

本文件规定了花椒组织培养快繁的培养容器与接种器械的灭菌、培养基的配制与灭菌、外植体的处理、芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗与移栽等技术。

本文件适用于花椒的组织培养快繁育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

花椒

芸香科花椒属花椒（ZanthoxylumbungeanumMaxim.）3.2

外植体

从植物活体上切取下来用于建立组织培养体系的材料，包括完整植株、器官或组织。3.3

组织培养

在无菌条件下，将外植体接种在装有人工配制培养基的培养瓶中。将培养瓶放置于人工控制光照和温度的组织培养室内，使之生长、分化或发育成完整植株的培养技术。

3.4

芽诱导

将培养材料在诱导培养基中进行培养，诱导分化出不定芽的过程。

3.5

增殖培养

把诱导产生的芽转移到增殖培养基进一步扩大培养的过程。

3.6

生根培养

将芽转移到生根培养基中诱导生根从而形成完整植株的过程。

3.7炼苗

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指将初步生长良好的组培生根苗移植到接近自然的环境条件中，通过调整光照、温度、湿度等措施，逐步减少人工营养供给，促使其根系发育、增强抗逆性和生长能力，以便定植后能够迅速适应自然环境。这是组培苗由组织培养环境逐渐适应自然环境的驯化过程，为后续的移栽或种植奠定基础。

3.8移栽

又称移植，指把在苗床中的幼苗移裁到田间生长，

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

6-BA：六苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine）

NAA：萘乙酸（NaphthaleneAceticAcid）

TDZ：噻苯隆（Thidiazuron）

IBA：吲哚丁酸（IndolebutyricAcid）

WPM：WPM基本培养基（WoodyPlantMedium）

MS：MS培养基（MSculturemedium）

5培养容器与接种器械的灭菌

将培养容器瓶、手术剪、镊子、手术刀等接种器械用报纸或灭菌袋包好，于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min。

6培养基的配制与灭菌

以WPM+20g/L白砂糖+5.0g/L琼脂为基本培养基进行培养基配置（WPM培养基成分表见附录A）。培养基的灭菌按照LY/T1882的要求，将配置好的培养基分装至组培瓶中，于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min，之后取出备用。

7外植体的处理

7.1外植体选择

选生长健康的花椒叶片的叶柄为外植体。

7.2无菌水的准备

取一定体积的蒸馏水于三角瓶等容器中，于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min，之后取出备用。

7.3外植体处理

取花椒叶片的叶柄，用清水清洗后，75%酒精浸泡5min，再用0.1%氯化汞消毒3min～5min，无菌水冲洗5次，备用。

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8芽诱导

接种时，将叶柄去掉两头，接种于0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.003mg/LTDZ的WPM基本培养基上，培养基中蔗糖浓度20g/L，琼脂浓度5.0g/L。培养瓶放置于培养室中。

培养温度为25±2℃,每日补充光照12h，光照强度1500lx～3000lx。培养30d左右分化出芽。

9增殖培养

增殖培养基选用与芽诱导相同的培养基。

将诱导出的芽接种于培养基上。培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间按照芽诱导内容执行。

20d左右开始出芽，更换同样新培养基，30d～35d后形成高1cm以上的丛生芽。

10生根培养

当诱导出的丛生芽长到约3cm高时，从茎基部切下，接种于1.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA的WPM基本培养基上进行生根培养，培养基中蔗糖质量浓度为35g/L，琼脂4.5g/L。

培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间按照芽诱导内容执行。

10d～15d后开始分化出根，30d以后形成长3cm以上的根。

11炼苗与移栽

当花椒幼苗的根在生根培养基上长到约3cm时，逐步去掉组培瓶盖，在温室内锻炼1周左右，然后移入盛有蛭石或草炭土(经5%的高锰酸钾消毒处理或121℃高温灭菌20min)的营养钵中。

用MS（MS营养液成分见附录B）营养液浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度25℃~28℃,开始2周空气湿度85%以上，2周后湿度逐渐降低与室外环境相同，4～5周后，可以移栽到大田中。

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附录