逆境胁迫水稻幼苗及其生理指标分析.pptxVIP

《植物生物学实验》

逆境胁迫水稻幼苗及其生理指标分析;01;一、实验目的;;;;;;;;;;;;;植物盐胁迫的伤害表现;;;五、实验分组;;;二、实验原理;SOD测定方法;;;;;二、实验材料、仪器与试剂;主要试剂配制（供参考）：

（1）50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.8）：

A液：NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）：3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。

B液：Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）：7.17g溶于蒸馏水，定溶至100ml。

取A液8.5ml与B液91.5ml混合，定容至400ml，pH7.8。

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（2）SOD提取液：50mmol/L磷酸缓冲液[含0.1mmol/LEDTA；0.3%(w/v)TritonX-100；2-4%（w/v）聚乙烯聚吡咯烷酮（PVP）,pH7.8]。

即每升磷酸缓冲液中加20gPVP，200μl0.5mol/L的EDTA母液，3mlTritonX-100。

;（3）14.5mmol/L甲硫氨酸（分子量149.21）：

称2.163g溶于蒸馏水，定溶至1000ml(较难溶，需稍微加热）。

（4）2.25mmol/LNBT（分子量817.7）：

称92mg溶于50ml50mM磷酸磷酸缓冲液（pH7.8），现配现用，避光保存。

（5）60μmol/L核黄素（分子量376.36）：

称2.25mg溶于50ml50mM磷酸磷酸缓冲液（pH7.8），现配现用，避光保存。

（6）3μmol/LEDTA-Na2（分子量372.24）：

A、0.5mol/L：称9.306g溶于蒸馏水，定容至50ml。

（注意：搅拌时用NaOH调pH至8.0才能完全溶解）。

B、0.5mmol/L：取A液1ml用蒸馏水稀释定容至1000ml。

C、3μmol/L：取B液3ml用磷酸缓冲液稀释定容至500ml。

;;2.反应体系;3.做预实验：在正式测定SOD活性之前，要进行酶液加入量的预实验，以确定最佳酶液浓度。

酶液稀释：取其中一管酶液按1倍、10倍、100倍稀释。

混合液配制：计算4-5支试管的用量，按反应体系表中各溶液(除酶液外)配制1份混合液(现用现配)。

加酶液：在每支试管中加混合液2.95ml，再分别加入相对应的酶液量，其中2支空白对照用提取液代替酶液，混匀，马上用黑色塑料袋罩住。

照光反应：取1支对照管于暗处，其余的置于试管架上，于4000Lx日光灯下反应20min（要求各管受光情况一致，光照时间视具体情况而定，如光照强、温度高则时间缩短，反之则延长，时间要严格控制）。

终止反应：照光完毕马上用黑色塑料袋罩住试管架，以终止反应。

SOD活性测定：以不照光的对照管做空白，分别测定各管OD值。

确定酶液加入量：以抑制率在35%-65%为佳。;4.正式实验;;SOD总活性：以每克鲜重酶单位表示。

SOD比活力：以酶单位／mg蛋白表示。

ACK：照光对照管的吸光度；AE：样品管的吸光度；

V：样品液总体积（ml）；Vt：测定时样品用量（ml）；

W：样品鲜重（g）；蛋白质浓度单位：mg蛋白／g鲜重。;;;