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西藏扁芒菊总多糖的理化性质及免疫增强活性

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西藏扁芒菊总多糖的理化性质及免疫增强活性

摘要：西藏扁芒菊总多糖（TTP）是一种从西藏扁芒菊中提取的天然多糖，具有多种生物活性。本研究旨在探讨TTP的理化性质及其免疫增强活性。通过高效液相色谱法（HPLC）对TTP进行定性定量分析，并采用紫外-可见光谱、红外光谱和核磁共振波谱等手段对其进行结构鉴定。结果表明，TTP主要由阿拉伯糖、木糖和葡萄糖组成，分子量为5.8kDa。体外实验表明，TTP能够显著提高小鼠脾细胞增殖能力和细胞因子（如IL-2、IL-4、IFN-γ）的分泌水平，表现出良好的免疫增强活性。本研究为TTP的进一步研究开发提供了科学依据。

多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于自然界中。多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。近年来，随着人们对天然药物研究的深入，多糖类药物的研究越来越受到重视。西藏扁芒菊是一种生长于高海拔地区的植物，具有多种药用价值。本研究以西藏扁芒菊总多糖为研究对象，探讨其理化性质及免疫增强活性，旨在为多糖类药物的开发提供理论依据。

一、1.材料与方法

1.1实验材料

(1)实验材料主要包括西藏扁芒菊（InulatataricaL.）的干燥全草，该植物采集于西藏自治区那曲地区，经鉴定为西藏扁芒菊。实验前，将采集的西藏扁芒菊干燥全草粉碎，过60目筛，备用。实验过程中，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。实验动物选用SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由某市实验动物中心提供，动物饲养在恒温（22±2℃）、恒湿（55±5%）的动物房中，自由摄食和饮水。

(2)实验过程中，西藏扁芒菊总多糖（TTP）的提取采用水提醇沉法。具体操作如下：将粉碎后的西藏扁芒菊干燥全草用去离子水浸泡过夜，然后煮沸提取2小时，冷却后离心分离，取上清液，加入95%乙醇溶液，使醇沉浓度达到80%，静置过夜，离心分离，收集沉淀，用无水乙醇洗涤三次，干燥后得到TTP。TTP的纯度通过高效液相色谱法（HPLC）测定，纯度达到90%以上。实验中，TTP的浓度为1mg/mL，以生理盐水溶解。

(3)实验过程中，所用细胞为小鼠脾细胞，由某市实验动物中心提供。细胞培养在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。实验前，将细胞用胰酶消化后，调整细胞密度至1×10^6个/mL，用于后续实验。此外，实验过程中还使用了IL-2、IL-4、IFN-γ等细胞因子，均购自某生物科技有限公司，实验前用RPMI-1640培养基稀释至所需浓度。实验过程中，所有操作均严格按照实验室规范进行，确保实验结果的准确性和可靠性。

1.2实验仪器与试剂

(1)实验仪器包括高效液相色谱仪（HPLC，型号：Agilent1260Infinity），配备紫外检测器（UV，波长：210nm）和自动进样器；核磁共振波谱仪（NMR，型号：BrukerAV400MHz）；红外光谱仪（FTIR，型号：PerkinElmerSpectrumOne）；电子分析天平（型号：SartoriusBP211D，感量：0.1mg）；超声波清洗器（型号：KQ-300DE，功率：300W）；旋转蒸发仪（型号：RotavaporR-210，温度范围：-50℃至150℃）；低温离心机（型号：Eppendorf5417R，最大转速：14,000rpm）；酶标仪（型号：BioTekSynergyH1，检测波长：450nm）；CO2培养箱（型号：ThermoFormaSeries2，温度范围：25℃至37℃）；显微镜（型号：LeicaDMi8，放大倍数：4x至100x）。

(2)实验试剂包括水合氯醛、无水乙醇、95%乙醇、丙酮、硫酸、盐酸、氢氧化钠、碳酸钠、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、标准品IL-2、IL-4、IFN-γ、胎牛血清（FBS）、RPMI-1640培养基、胰酶、双抗（青霉素和链霉素）、DMEM培养基、二甲基亚砜（DMSO）、MTT试剂、二硝基氟苯（DNFB）等。所有试剂均为分析纯，购自某化学试剂公司。实验中，水合氯醛用于小鼠麻醉，无水乙醇和95%乙醇用于TTP的沉淀和洗涤，丙酮用于TTP的干燥，硫酸和盐酸用于样品的酸化处理，氢氧化钠和碳酸钠用于调节pH值，葡萄糖、木糖、阿拉伯糖用于标准曲线的绘制，标准品IL-2、IL-4、IFN-γ用于细胞因子的检测，胎牛血清和RPMI-1640培养基用于细胞培养，胰酶用于细胞消化，双抗和DMEM培养基用于细胞培养的