高效液相色谱法.ppt

封尾（end-capping）：在键合反应后，用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅醇基。覆盖度：已反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例含碳量：含碳的百分数键合相的性质键合相的性质和特点键合相的特点使用过程中不流失；化学稳定性好；适于梯度洗脱；载样量大01注意：流动相的pH一般应在3-8，否则会引起硅胶溶解；(也有适用宽pH范围的键合相)。02键合相的性质和特点与固定相不发生化学反应。1对试样有适宜的溶解度。使k在1~10范围内，2与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。3纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱压，提高柱效。4对流动相的要求：二、化学键合相色谱法的流动相n由色谱柱（固定相）性能决定，1α主要受溶剂种类的影响，2k受溶剂配比的影响。3流动相对分离的影响溶剂的极性（强度）正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强溶剂的选择性不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同混合溶剂（二元或多元流动相）010302流动相的强度和选择性HPLC中的速率理论三、分离条件的选择涡流扩散A=2λdp球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。纵向扩散β=2γDm可以忽略。因为Dl很小，室温操作，且U大于U最佳，HPLC中的速率理论传质阻抗固定相传质阻抗CS可以忽略，因df极小流动相传质阻抗Cm要求：dp小，Dm大静态流动相传质阻抗 ：由于部分流动相在固定相微孔内的滞留静态流动相传质阻抗系数CsmCsm∝dp2，Csm∝1/Dm，而Dm∝T/η要求:固定相dp2、流动相η都小01HPLC中的速率理论02H=A+Cmu+Csmu原因：化学键合相，液体流动相结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。HPLC中的速率理论极性键合相如氰基、氨基键合相等01固定相烷烃加适量极性调节剂02流动相（二）正相键合相色谱法的分离条件固定相非极性键合相如ODS流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂加入0.1%~1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用0102（三）反相键合相色谱法的分离条件反相离子对色谱法的分离条件01固定相 尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相，离子对试剂 离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反流动相pH使试样组分与离子对试剂全部离子化有机溶剂及其浓度同一般HPLC02进样系统检测系统输液系统色谱柱系统数据记录处理系统组成第三节高效液相色谱仪仪器分析第十八章高效液相色谱法化学分析第一章绪论化学分析第一章绪论仪器分析第十八章高效液相色谱法化学分析第二章化学分析第一章绪论第十八章高效液相色谱法

highperformance

liquidchromatography；HPLC经典液相色谱法为基础，引入气相色谱法的理论和实验技术，高压输送流动相，高效固定相及高灵敏度检测器，现代液相色谱分析方法。STEP1STEP2STEP3颗粒极细（一般为10?m以下）、规则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高，分离效率高；高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10?9g，而荧光检测器最小检测限可达10?12g。与经典液相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高；与气相色谱法相比第一节高效液相色谱法的主要类型和原理主要类型四类基本类型色谱法分配色谱法（partitionchromatography）吸附色谱法（adsorptionchromatography）离子交换色谱法（IEC）空间排阻色谱法（SEC）第一节高效液相色谱法的主要类型和原理一、主要类型四类基本类型色谱法分配色谱法（partitionchromatography）吸附色谱法（adsorptionchromatography）离子交换色谱法（IEC）空间排阻色谱法（SEC）化学键合相色谱法1243亲合色谱法（af