DB36T 1526-2021 山药主要病原线虫鉴定技术规程　　.docxVIP

ICS65.020B16

DB36

江西省地方标准

DB36/T1526—2021

山药主要病原线虫鉴定技术规程

TechnicalregulationforidentificationofthemainpathogenicnematodeofChineseyam

2021-12-14发布2022-06-01实施

江西省市场监督管理局发布

I

DB36/T1526—2021

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4符号 1

5设备和试剂 2

6样品采集与分离 2

7形态学鉴定 2

8分子鉴定 4

附录A（规范性）线虫玻片标本制作方法 6

附录B（规范性）山药主要病原线虫形态特征图 8

附录C（规范性）山药主要病原线虫分子鉴定系统发育树 10

II

DB36/T1526—2021

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：江西省农业科学院农业应用微生物研究所、吉安市农业科学研究所、吉安市永丰县蔬菜产业发展中心、吉安市泰和县塘洲镇人民政府。

本文件主要起草人：范琳娟、徐雪亮、刘子荣、喻吉生、涂年生、康宏波、胡平华、姚英娟。

1

DB36/T1526—2021

山药主要病原线虫鉴定技术规程

1范围

本文件规定了山药主要病原线虫南方根结线虫和咖啡短体线虫的术语和定义、符号、设备及试剂、样品采集与分离、形态学鉴定方法和分子生物学鉴定方法。

本文件适用于山药等块茎类植物根部和土壤及栽培介质中的南方根结线虫和咖啡短体线虫鉴定。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

南方根结线虫Meloidogyneincognita(KofoldWhite,1919)Chitwood,1949中文名：南方根结线虫

分类地位：线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、异皮科(Heteroderidae)，根结线虫属(Meloidogyne)。

南方根结线虫幼虫属于移动性内寄生，雌虫为固定内寄生。寄主范围很广，通常可危害几百种植物，主要发生在植物根部，其中侧根和须根最易受害。受害根系常形成大小和形状不同的瘤状根结，使植物根系吸收、输送养分和水分的能力降低；地上部表现为营养不良，矮化、瘦弱、生长缓慢。

3.2

咖啡短体线虫Pratylenchuscoffeae(Zimmermann,1898)FilipjevSchuurmansSteckhven,1941

中文名：咖啡短体线虫

分类地位：线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、短体科(Pratylenchidae)，短体线虫属（Pratylenchus）

咖啡短体线虫属于三类检疫性线虫，属多食性的植物寄生线虫，可寄生250多种植物，主要农作物寄主包括山药、马铃薯、芋头、玉米和姜等，在我国多个省份均有广泛分布。其属于寄主根系皮层的迁移性内寄生线虫，受害根系常出现褐色病斑，伴随次生病原物，引起根部腐烂，发生严重会引起植株死亡。

4符号

L—虫体体长(μm或mm）；

2

DB36/T1526—2021

a—体长/最大体宽；

b—体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离；b’—体长/虫体前端至食道腺末端的距离；

c—体长/尾长；

St—口针长度(μm）；

T—泄殖腔开口至精巢末端的距离×100/体长；V—虫体前端至阴门的距离×100/体长；

tail—尾长(μm）；

DEGO—背食道腺开口至口针基部球距离(μm）。

5设备和试剂

5.1主要设备

生物显微镜、体视显微镜具投射光源、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机（2000rmp以上）。

5.2主要试剂

5.2.1形态学鉴定用试剂

指甲油、4%甲醛、甘油、乳酚油（苯酚20mL、乳酸20mL、甘油40mL和蒸馏水20mL混合而成）、石蜡、95%酒精。

5.2.2分子生物学鉴定用试剂

单条线虫DNA提取裂解液、