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FAC对体外培养皮质神经干细胞分化率的

影响

作者：焦玲玲焦倩杜希恂李勇张培姜宏

来源：《青岛大学学报（医学版）》2018年第02期

摘要[]目的探讨不同浓度柠檬酸铁铵（FAC）对体外培养的大鼠皮质神经干细胞（NSCs）

细胞活力和分化率影响。

方法体外培养胚胎14～15d的皮质NSCs；应用CCK8细胞增殖和毒性检测试剂盒检测经

FAC处理后NSCs细胞活力的改变，免疫荧光染色检测Nestin、βtubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋

白（GFAP）阳性细胞，WesternBlot检测NSCs的βtubulinⅢ和GFAP蛋白表达水平。

结果分离培养的皮质NSCs能增殖形成神经球，且经分化培养基诱导后可分化为βtubulin

Ⅲ或GFAP阳性的细胞。不同浓度（10～100mg/L）的FAC均可降低细胞活力（F=55.86，

q=9.154～15.880，P0.05）。

结论FAC可降低皮质NSCs细胞活力，但不影响NSCs向神经元和星形胶质细胞的分化比

例。

关键词[]神经干细胞；铁；细胞活力；细胞分化

中图[分类号]R329.2

文献标志码[]A

文章编号[]2018

神经干细胞（NSCs）是存在于胚胎脑部和成熟个体中枢神经系统中具有增殖和多向分化

潜能的一类细胞，可通过对称性分裂进行增殖和自我更新，通过不对称性分裂分化成为神经元

或胶质细胞等[14]。因其具有增殖和多向分化潜能，NSCs移植可弥补丢失的神经元，成为神

经系统疾病细胞替代治疗的可行性方案之一[58]。但移植入体内的NSCs的存活、凋亡、增殖

和分化受到宿主机体内微环境的影响，因此研究影响NSCs存活和分化的因素对干细胞移植治

疗至关重要[910]。越来越多的研究显示了金属铁与神经退行性疾病有密切联系，如帕金森病

（PD）和阿尔兹海默病（AD）等[1113]。近年来研究表明，PD病人黑质致密带的铁含量升高

明显，水平异常升高的铁可能通过促进活性氧（ROS）的生成，损伤多巴胺（DA）能神经元

[1415]。有研究顯示，AD病人脑内的海马和皮质区铁沉积明显增加[16]。有文献报道，给予高

铁饮食的新生小鼠纹状体内铁明显增多，且脑干和纹状体内羟自由基水平增高[17]。因此，移

植于脑内的NSCs的存活和分化可能受到高铁微环境的影响。然而，高铁环境对NSCs分化率

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的影响尚未见报道。柠檬酸铁铵（FAC）是一种广泛应用于制备铁负载模型的三价铁[1819]，

可造成细胞内的高铁状态。本文通过体外培养皮质NSCs，外源性给予FAC的方法，观察不同

浓度的FAC对皮质NSCs细胞活力和分化率的影响。

材料和方法1

实验材料1.1

Wistar大鼠（购自北京维通利华实验动物技术有限公司），FAC（Sigma公司），

DMEM/F12培养液（Hyclone公司），表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维生长因子

（bFGF）、N2supplement、B27supplement和胎牛血清（Gibco公司），兔源βactin抗体

（CST公司），小鼠源βtubulinⅢ抗体、山羊抗鼠IgG荧光二抗（Invitrogen公司）