TNAIA 0348-2024 黄芩中7种黄酮类物质含量的测定 高效液相色谱法.docx

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黄芩中7种黄酮类物质含量的测定高效液相色谱法

Determinationof7flavanoidsinastragalusHighperformanceliquidchromatography

2024-12-12发布 2024-12-31实施

宁夏化学分析测试协会 发布

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏食品检测研究院、宁夏化学分析测试协会。

本文件主要起草人：刘霞、牛艳、杨静、王晓菁、石欣、吴燕、苟春林、张锋锋、李彩虹、杨春霞、王彩艳、陈翔、开建荣、张学玲、张小飞。

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黄芩中7种黄酮类物质含量的测定高效液相色谱法

范围

本文件规定了黄芩中黄酮类物质的液相色谱测定方法。

本文件适用于液相色谱法测定黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、木犀草素、芹菜素、千层质素A的液相色谱法测定。

本文件的方法检出限：黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的方法检出限均为

0.075mg/kg，木犀草素、芹菜素的方法检出限均为0.15mg/kg，千层质素A的的方法检出限为0.10mg/kg。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

术语和定义

本文件没有需要规定的术语和定义。

原理

试样中的黄酮类物质经70%甲醇超声提取，旋蒸近干，甲醇定容，微孔滤膜过滤，液相色谱仪检测和确证，外标法定量。

试剂与材料

除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。

乙腈（CH3CN）：色谱纯。

甲醇（CH3OH）：色谱纯。

磷酸（H3PO4）：分析纯。

黄芩苷（Baicalin，CAS号21967-41-9，纯度≥98%）、木犀草素（Luteolin，CAS号491-70-3，纯度≥98%）、汉黄芩苷（Wogonoside，CAS号51059-44-0，纯度≥98%）、黄芩素

（Baicalein，CAS号491-67-8，纯度≥98%）、芹菜素（Apigenin，CAS号520-36-5，纯度≥98%）、汉黄芩素（Wogonin，CAS号632-85-9，纯度≥98%）和千层质素A（OroxylinA，CAS号480-11-5，纯度≥98%）的液相色谱法测定。

标准储备溶液：分别准确称取黄芩苷、木犀草素、汉黄芩苷、黄芩素、芹菜素、汉黄芩素和千层质素A标准物质10mg（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10.0mL，配制成1000mg/L的标准储备液，0℃~4℃贮存。

0.1%磷酸溶液（体积分数）：量取1mL磷酸，用水定容至1000mL。

70%甲醇溶液（体积分数）：量取700mL甲醇，用水定容至1000mL。

微孔滤膜：0.22μm，有机相。

离心管：50mL。

仪器与设备

液相色谱仪：配有紫外检测器。

6.2 分析天平：感量0.01g和0.0001g。

高速万能粉碎机：10000r/min。

超声波清洗机。

离心机：4000r/min。

涡旋混合器。

旋转蒸发仪。

分析步骤

试样的制备

将试样去除杂质，60℃烘箱中烘干48h，用高速万能粉碎机粉碎，四分法分取，过40

目筛，置于密封袋中备用。

试样的提取

平行做两份试样。称取试样0.2g（精确至0.0001g）于50mL离心管，加入40mL70%甲醇溶液（5.7），充分振摇混匀，超声提取30min，放入离心机，4000r/min离心3min，过滤，再取残渣加入40mL70%甲醇溶液（5.7），重复提取一次，合并2次滤液，旋蒸后用甲醇（5.2）定容于50mL容量瓶中，经0.22μm滤膜过滤，待测定。同试样进行空白试验，除不称取样品外，均按试样步骤进行。

液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm（i.d），5μm，或性能相当者；

b）柱温：40℃；

流速：0.