一种气态软性分层剥离促进皮下网状纤维组织立体重建的方法_转自TXT.docx

[发明公布]一种气态软性分层剥离促进皮下网状纤维组织立体重建的方法

申请号：201910005872X

发明人：杜剑波

申请人：杜剑波

摘要：

本申请公开了一种皮下网状纤维组织立体重建的方法。包括如下步骤：气态分层剥离，培养、诱导人多能干细胞，构建网状纤维组织。本发明能够使皮下网状纤维组织获得重建，并促进间充质干细胞因子的渗入，修复和补充受损细胞组织，改善皮肤重建能力，减缓皱纹的产生，和祛除深色的色素。采用本发明所提供的方法可以使肌肤新生有活力，肤色光亮透晰，并且本方法步骤简单，易于操作，易于推广。

权利要求书：

1.一种皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：步骤(1)气态分层剥离，步骤(2)培养、诱导人多能干细胞，步骤(3)构建网状纤维组织。

2.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的步骤(1)气态分层剥离为：以生理盐水将剔除脂肪及皮下组织的人源性皮肤清洗干净后，浸入DisapseⅡ中4℃消化；分离出皮片置于消化液中常温消化，血清终止消化；过滤。

3.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的步骤(2)培养、诱导人多能干细胞为：使用诱导培养基诱导，至人多能干细胞克隆内细胞体积变大、细胞形态由圆形或卵圆形变为多边形，排列紧密，克隆周边细胞呈梭形纤维状，终止诱导；将终止诱导的人多能干细胞克隆消化后使用分化培养基重悬并计数备用。

4.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的步骤(3)构建网状纤维组织为：将步骤(1)剥离后的皮片，加入包被液进行包被，再将步骤(2)获得的诱导人多能干细胞接种于其中，细胞贴附后，更换新鲜分化培养基培养后，使得皮下网状纤维组织获得重建。

5.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的诱导培养基为含有含有胎牛血清、β-巯基乙醇、谷氨酰胺的StemPro-34SFM培养基。

6.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述分化培养基为含ROCK抑制剂的5％DKSFM培养基。

7.根据权利要求1所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的包被液为层黏连蛋白、FNC或Matrigel。

8.根据权利要求2所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的消化液为胰蛋白酶-EDTA消化液。

9.根据权利要求8所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶-EDTA消化液的获得方法为：D.Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，2～5℃保存备用；将胰蛋白酶粉末于研磨器中，加入D-Hanks液研磨800～1200次，调制成糊状；再放入2～5℃预冷的适量D-Hanks液中，2～5℃下磁力搅拌使完全溶解；用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至7.9～8.1，并加入0.01～0.05％EDTA以协助消化作用；滤过除菌，-18～22℃冻存。

10.根据权利要求9所述的皮下网状纤维组织立体重建的方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶-EDTA消化液的获得方法为：D.Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用；将胰蛋白酶粉末于研磨器中，加入D-Hanks液研磨1000次，调制成糊状；再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解；用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0，并加入0.02％EDTA以协助消化作用；滤过除菌，-20℃冻存。

技术领域

[0001]本申请涉及美容技术领域，具体而言，涉及一种皮下网状纤维组织立体重建的方法。

背景技术

[0002]皮肤可分表皮、真皮及皮下组织三层，最外表为表皮，只有0.2毫米厚，可防止外界异物入侵，有过滤紫外线，吸收紫外线，锁水，分裂增生细胞等等。

[0003]表皮下层，占有大部分结构的是真皮层，厚度为0.2厘米左右，又可分为三层，即乳头层、乳头下层及网状层等，大部分由蛋白质所构成，此部分蛋白质是同胶原蛋白及弹性蛋白(elastin)组成，其他则是神经、毛细血管、汗腺及皮脂腺、淋巴管及毛根等组织构成。

发明内容

[0004]针对现有技术中的不足之处，本申请提供了一种气态软性分层剥离促进皮下网状纤维组织立体重建的方法。

[0005]所述的方法包括如下步骤：气态分层剥离，培养、诱导人多能干细胞，构建网状纤维组织。

[0006]具体的，所述的气态分层剥离为：以生理盐水将剔除脂肪及皮下组织的人源性皮肤清洗干净后，浸入DisapseⅡ中4℃消化；分离出皮片置于消化液中常温消化，血清终止消化；过滤。

[0007]具体的，所述的培养、诱导人多能干细胞为：使用诱导培养基诱导，至人多能干细胞克隆内细胞体积变大、细胞形态由圆形或卵圆形变为多边形，排列紧密