生物化学实验 肝糖原提取、鉴定与定量实验流程 学习资料.docVIP

肝糖原提取、鉴定实验流程

吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。

鸡肝约1g，剪碎

＋5%CCl3COOH1ml

研磨至乳状

＋5%CCl3COOH3ml

研磨成肝匀浆

全部转入离心管中，离心3分钟（4000r/min）

沉淀（弃去）上清（取2ml）

＋2ml95%乙醇，混匀，静置10分钟

离心5分钟（4000r/min）

上清（弃去）沉淀

＋蒸镏水1ml

沸水浴2分钟，溶解沉淀

白瓷板孔穴中糖原溶液1ml

＋浓HCl5滴

加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却

糖原溶液2滴＋50%NaOH5滴

呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液

＋班氏试剂4滴

混匀

沸水浴2分钟，观察变化

肝糖原定量实验流程

鸡肝0.10～0.15g

＋30%KOH1.5ml（用吸量管）

沸水浴15分钟

冷却，全部转入100ml容量瓶中

加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液

糖原的测定

取3支试管，按下表操作。

试剂（ml）

空白管

标准管

样品管

蒸馏水

1.0

—

—

标准葡萄糖溶液

—

1.0

—

糖原提取液

—

—

1.0

0.2%蒽酮溶液

（用吸量管）

2.5

2.5

2.5

混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。