3.1.2 DNA的粗提取与鉴定【知识精讲精研】高二下学期生物人教版选择性必修三.pptx

第3章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具第2课时探究·实践DNA的粗提取与鉴定

一、基本思路实验设计思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。1.提取原理（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。（2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液。二、原理2.鉴定原理在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。00.14NaCI浓度（mol/L）DNA溶解度选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

三、材料用具DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。1.选材：用洋葱做材料，为什么要充分研磨？充分研磨，可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA。猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料？操作时如何防止血液凝固？猪血（哺乳动物的成熟红细胞）无细胞核，不适合；鸡血中红细胞有核DNA，且核DNA的量较多，适合。鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA吗？加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。

试剂研磨液体积分数为95%的酒精二苯胺2mol/L的NaCl溶液蒸馏水溶解并提取DNA析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA2.试剂：

四、实验步骤取材研磨DNA析出DNA鉴定过滤

取材研磨过滤DNA析出DNA鉴定四、方法步骤称取，切碎，放入研钵，倒入，研磨。洋葱研磨液充分问题：如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA

取材研磨DNA析出DNA鉴定四、方法步骤称取，切碎，放入研钵，倒入，研磨。洋葱研磨液充分破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量研磨效果好（有利于充分研磨）(4)研磨不宜太用力(1)研磨的目的：(2)研磨时间不宜太长：(3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶过滤

取材研磨过滤DNA析出DNA鉴定四、方法步骤在漏斗中垫上过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取。纱布上清液上清液问题1：过滤能用滤纸代替吗？不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。问题2：上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？可能含有核蛋白、多糖等杂质

DNA析出DNA鉴定四、方法步骤取材研磨过滤在上清液中加入体积相等的溶液,静置2~3min，溶液中出现的就是粗提取的DNA。预冷的酒精白色丝状物问题1：此步骤的目的是？使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。问题2：酒精预冷的作用？①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。问题3：搅拌时应轻缓、并沿一个方向目的？减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子

DNA析出DNA鉴定四、方法步骤取材研磨过滤将丝状物或沉淀物溶于溶液中，加入试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。二苯胺2mol/L的NaCl加入2mol/L氯化钠溶液不加入丝状物加入4ml二苯胺试剂加入2mol/L氯化钠溶液加入丝状物加入4ml二苯胺试剂实验组对照组水浴加热评价结果：（1）DNA纯度：看提取物颜色（2）DNA的量：看与二苯胺反应颜色的深浅

二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。五、结果分析与评价本实验粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。①材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。③二苯胺最好现用现配，二苯胺易被空气氧化，颜