DB34_T 4204-2022 猪圆环病毒3型套式PCR检测技术规程.docx

ICS11.220CCSB41

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安徽省地方标准

DB34/T4204—2022

猪圆环病毒3型套式PCR检测技术规程

TechnicalregulationfornestedPCRdetectionmethodforporcinecircovirustype3

2022-06-29发布2022-07-29实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T4204—2022

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省动物疫病预防与控制中心提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽农业大学、合肥市动物疫病预防控制中心、萧县畜牧兽医水产服务中心、岳西县畜牧兽医水产服务中心、望江县畜牧兽医技术推广中心。

本文件主要起草人：何长生、陈静、黄晓慧、王立、纵丰学、王南山、李少炎、王倩、沈艳、王维、范亚楠、苗文萍、陈曦、周迎春、王军、刘华、段倩倩、郑举、江定丰、沈岚、胡成威、朱良强、李郁。

DB34/T4204—2022

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猪圆环病毒3型套式PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了猪圆环病毒病3型套式PCR检测方法的主要仪器设备、试剂、引物、样品采集、运输与保存、样品处理、样品DNA提取、套式PCR扩增、结果判定、实验废弃物无害化处理、实验室分区、实验室生物安全管理要求。

本文件适用于猪圆环病毒3型核酸套式PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

SN/T1193基因检验实验室技术要求

《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猪圆环病毒3型porcinecircovirustype3，PCV3

猪圆环病毒属于圆环病毒科、圆环病毒属，根据其致病性、抗原性及基因组序列分为1型、2型和3型等基因型，猪圆环病毒3型是2015年发现的新型圆环病毒亚型。

4主要仪器设备

4,1PCR仪。

4.2台式高速冷冻离心机：可控温至4℃,离心力12000g以上

4.3全自动组织快速碾磨仪。

4,4涡旋振荡器

4.5冰箱：2℃~8℃、-20℃、-70℃三种。

4,6电泳仪。

4.7水平电泳槽。

4.8凝胶成像系统

4.9可调微量移液器：最大量程分别为10μL、50μL、100μL、1000μL。

4.10高压蒸汽灭菌锅

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4.11电子天平：精确度0.001g。

5试剂

5.1灭菌一级水：符合GB/T6682，121℃、20min，高压蒸汽灭菌。

5.2DNA提取纯化试剂盒：商品化试剂。

5.32×EasyTaqSuperMix：商品化试剂。

5.40.5×TBE缓冲液：称取108gTris、7.44g枸橼酸钠、55g硼酸，溶于1000mL水中，配成10×TBE缓冲液备用。使用时，取10×TBE缓冲液25mL，加水475mL，制成0.5×TBE缓冲液。

5.51％琼脂糖：称取1g琼脂糖，溶于100mL0.5×TBE缓冲液中。

5.6磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800mL水中，用HCl调节溶液的pH值至7.2，最后加水定容至1L，高压蒸气灭菌（121℃、至少20min），保存于室温或4℃冰箱中。

5.7无水乙醇：分析纯。

5.8DNA核酸染料：商品化试剂。

5.9DNA分子量标准：DL2000Marker，商品化试剂。

5.10