基因工程的基本操作程序（第2课时）高二生物高效教学课件（人教版2019选择性必修3）.pptx

3.2基因工程的基本操作程序-2

目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建（核心）将目的基因导入受体细胞第一步第二步第三步第四步目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序构建基因表达载体时，需要哪些工具酶？获取目的基因的方法有哪些？表达载体上包含哪些重要的元件？合作探究：根据受体细胞的不同，将目的基因导入受体细胞方法？适用对象？农杆菌的特点？农杆菌转化法原理请用文字和箭头表示农杆菌转化法的过程

三.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞的方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞P82倒数第二段将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法花粉管通道法——显微注射法——Ca2+处理法（我国科学家独创）

（1）花粉管通道法（我国科学家独创）方法2：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。方法1：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中目的基因目的基因适用生物：开花植物1.目的基因导入植物细胞思考：该方法的受体细胞是？三.将目的基因导入受体细胞

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤等科学研究发现，当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移至受体细胞染色体的DNA上。这种酚类化合物主要在双子叶植物细胞壁中合成，单子叶植物通常没有（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞

（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞A.载体?B.受体细胞?1、农杆菌转化法一般适用于将目的基因导入（单/双子叶）植物？2、农杆菌具有怎样的结构基础，利于目的基因进入植物细胞？3、为使目的基因在受体细胞中稳定存在，在构建基因表达载体时，应将目的基因插入哪里？4、结合农杆菌转化法示意图，归纳其基本步骤。5、这一过程中共有几次DNA分子的拼接，几次导入细胞？阅读81页资料卡，思考以下问题：(2min)

（2）农杆菌转化法转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。1.目的基因导入植物细胞农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。（可转移的DNA）关于农杆菌原理：农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。此处的“转化”与肺炎链球菌转化实验的“转化”实质是相同的，都是基因重组。过程：如果将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞转化的实质属于哪一种变异类型？

目的基因含有目的基因的重组Ti质粒T-DNATi质粒植物细胞含重组Ti质粒的农杆菌表现新性状的植株导入植物细胞转入农杆菌构建基因表达载体目的基因插入染色体DNA中植物组织培养（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞①②③④⑤⑥讨论：1、请说出序号代表的含义？2、这一过程中共有几次DNA分子的拼接，几次导入细胞？2次，2次

农杆菌转化法中有两次拼接和两次导入:第一次拼接:将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA的中间部位；第二次拼接(非人工操作):指被插入目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上。第一次导入:是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作):是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

（2）农杆菌转化法1.目的基因导入植物细胞随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功。农杆菌转化法的实例：（1）可将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。具体转化方法：（2）可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。思考：1、方法1筛选出的转化细胞怎样再生成植株？2、以上两种方法的受体细胞有何不同？

（1）导入方法：（2）受体细胞:显微注射法2.将目的基因导入动物细胞受精卵为什么动物受体细胞选用受精卵而不用体细胞呢？①易表现出全能性。②体积大，易操作。（3）过程：构建基因表达载体并提纯利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物课本82页倒二段

2.将目的基因导入动物细胞科学家也用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内。如用腺病毒载体，搭载新冠病毒S基因，进入人体内，使人体产生对S蛋白的免疫记忆。其他方法病毒侵染法（主要用于导入动物细胞