DB65_T 4671-2023 土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定规程.docxVIP

ICS65.020.01

CCSB05

DB65

新疆维吾尔自治区地方标准

DB65/T4671—2023

土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定规程

CodeofpracticefordetectionandisolationidentificationofcottonVerticilliumdahliaeinsoil

2023-07-20发布2023-09-20实施

新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布

I

DB65/T4671—2023

目次

前言 III

1范围

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5仪器和试剂 1

5.1仪器设备 2

5.2试剂与材料 2

5.3培养基的配制 2

6土壤采集与处理 2

6.1土壤采集 2

6.2土壤处理 2

7病菌数量检测 2

8病菌分离鉴定 2

8.1病菌分离纯化 2

8.2分子生物学鉴定 3

9标本及资料保存 3

9.1样品保存 3

9.2资料保存 3

附录A(资料性)土壤样品处理流程 4

附录B(资料性)溶液的配制 5

附录C(资料性)选择性培养基上黄萎病菌菌落形态 6

附录D(资料性)PDA培养基上棉花黄萎病菌菌落形态 7

附录E(资料性)PCR反应体系与反应条件 8

附录F(资料性)记录表格 9

III

DB65/T4671—2023

前言

本文件按照GB/T1.1——2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由新疆维吾尔自治区农业农村厅提出。

本文件由新疆维吾尔自治区农业农村厅归口并组织实施。

本文件起草单位：新疆维吾尔自治区植物保护站、新疆农业科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：刘海洋、王惠卿、王伟、张仁福、魏新政、姚举、努尔孜亚·亚力买买提、丁瑞丰、罗文芳。

本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区植物保护站。

本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区农业农村厅(乌鲁木齐市胜利路157号),新疆维吾尔自治区植物保护站(乌鲁木齐市胜利路157号),新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)。

新维吾尔自治区农业农村厅联系电话：0991-2878226;传真：0991-8551484;邮编：830000新疆维吾尔自治区植物保护站联系电话：0991-5508625;传真：0991-5856274;邮编：830000新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2817197;传真：0991-2311250;邮编

830004

1

DB65/T4671—2023

土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定规程

1范围

本文件规定了土壤中棉花黄萎病菌检测与分离鉴定的原理、仪器和试剂、土壤采集与处理、病菌数量检测、病菌分离鉴定、标本及材料保存的要求。

本文件适用于棉田土壤中棉花黄萎病菌无性态阶段的检测、分离与鉴定。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

选择性培养基selectivemedium

进行植物病原菌分离培养时，为促进目标菌落的形成，抑制其它杂菌的生长，在培养基中添加不同的碳源、氮源以及抑制性物质配制成具有选择生长能力的培养基。

3.2

棉花黄萎病菌verticilliumdahliae

棉花黄萎病菌无性态属丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Hyphomycetsles)、轮枝菌科 (Verticilliaceae)、轮枝菌属(Verticillium)。主要经由种子、土壤、病残体、雨水和灌溉水等进行传播。

3.3

微菌核microsclerotium

棉花黄萎病菌生长过程中，由单一或数条菌丝体膨大、胞壁增厚，向各个方向生长扩展并不断聚集形成的暗褐色或黑色较为坚硬的不规则休眠体。

3.4

分生孢子梗conidiophore

在直立的分生孢子梗每节基部膨大处轮生若干个小梗，通常由2层~4层轮生小梗及