基因工程的基本操作程序（第1课时）课件高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

构建基因表达载体的目的：①;;;;;;;启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比;思考：使用一种DNA限制酶进行切割，会得到几种重组DNA？有何缺点？;用两种限制酶切割质粒和含有目的基因的DNA片段。;载体与基因表达载体的辨析;限制酶的选择原则

(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类

①不破坏目的基因原则:如图甲中可选择PstⅠ,而不选择SmaⅠ。

②保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则:质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中不选择SmaⅠ。

③确保出现相同黏性末端原则:通常选择与切割目的基因相同的限制酶,如图甲中PstⅠ;为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。;(2)根据常规质粒的结构确定限制酶的种类;(3)若质粒上标出T-DNA片段,则所选限制酶切割位点应位于T-DNA片段中。设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ,则下图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取,而丙Ti质粒宜选取,分析如下:;只有该步骤没涉及碱基互补配对原则;特点：①;特点：①;第一次拼接：将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上;思考：将目的基因导入受体细胞时，能否仅把目的基因整合到线粒体DNA或叶绿体DNA上？为什么？;;;;;转Bt基因;目的基因的检测与鉴定;选择受精卵作为受体细胞的理由:

①体积大、易操作;

②全能性高，易培养成完整个体;;;1.农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环,并以此环为模板进行PCR,扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列,以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列相关叙述错误的是()

A.PCR技术依据的原理是DNA半保留复制

B.PCR技术需要解旋酶和耐高温的DNA聚合酶

C.选择图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列

D.通过与受体细胞的基因组序列比对来确定插入位置;2.科研团队利用农杆菌转化法将与植物花青素代谢相关的基因导入矮牵牛中,使它呈现出自然界没有的颜色变异。以下说法正确的是()

A.在自然条件下,农杆菌能侵染单子叶植物和裸子植物,而对大多数双子叶植物没有侵染能力

B.当农杆菌感染植物时,Ti质粒会进入受体细胞的染色体上

C.利用农杆菌介导的矮牵牛转基因技术有两次转化,第一次是将含目的基因的重组Ti质粒导入Mg2+处理的农杆菌中

D.检测转基因矮牵牛是否培育成功的第一步可以采用PCR等技术;√;(1)用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列()

(2)PCR不仅可以便捷地扩增DNA,还能直接扩增RNA()

(3)外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制()

(4)载体与目的基因结合的过程发生在细胞内()

(5)为培育抗除草剂的作物新品种,导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体()

(6)基因工程的操作步骤中,只有将目的基因导入受体细胞这一步骤没涉及碱基互补配对原则()

(7)构建基因表达载体时要注意保证目的基因上有启动子、终止子及标记基因等()

(8)目的基因一定是编码蛋白质的基因()

(9)真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋()

(10)PCR技术中的DNA延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制();(11)基因表达载体中的启动子和终止子决定着翻译的开始与结束()

(12)Ti质粒上的T－DNA可与植物受体细胞的染色体DNA整合在一起()

(13)为培育抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体()

(14)检测目的基因是否导入受体细胞可用抗原—抗体杂交技术()