重组DNA技术的基本工具课件高二下学期生物人教版选择性必修322.pptx

第1节重组DNA技术的基本工具

第2节基因工程的基本操作程序

第3节基因工程的应用

第4节蛋白质工程的原理和应用;目的基因;不能证明DNA是主要的遗传物质;一、重组DNA技术的基本工具

1.限制酶：

（1）来源及原因?

（2）作用?

（3）限制酶切割目的基因时需切割几次?产生几个末端?断开几个磷酸二酯键?

2.DNA连接酶：

（1）作用?

（2）分类?来源?作用的差别?

3.载体：

（1）载体的种类?

（2）载体的作用?

（3）质粒是什么?

（4）作为载体必须具备的条件是什么？;二、实验：DNA的粗提取与鉴定

1.DNA粗提取与鉴定的原理？

2.不能选择哺乳动物成熟的红细胞的原因？

3.研磨后过滤的方案是？

4.4℃冰箱放置几分钟的作用？搅拌时应轻缓、并沿一个方向的原因？

5.鉴定试剂？;科学家用到了限制酶、DNA连接酶、载体等“分子工具”。限制酶能识別双链DNA分子的特定核苷酸序列，并将DNA双链切断，形成具有黏性末端或平末端的片段。DNA连接酶催化磷酸二酯键的形成，即催化一个DNA片段3端的羟基与另ー个DNA片段5端的磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键。载体上可以插入外源基因，它能携带该基因进入受体细胞，并在受体细胞中进行自我复制，或者整合到受体DNA上，随着受体DNA同步复制。载体一般还带有标记基因，以便进行重组DNA分子的筛选。;;基因进入受体细胞的载体;;氢键的形成不需要酶的催化;;XbaⅠ,产生了相同的黏性末端;XbaⅠ,产生了相同的黏性末端;;相同点——作用位点都在磷酸二酯键

不同点——;与DNA有关的几种酶的比较;;载体需要具备的条件/特点：;标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞：;思考：

(1)为什么不能直接把目的基因导入受体细胞而要用载体？

(2)实践中常用某些病毒载体作为基因工程工具,除具备普通“质粒载体”的条件外,还应具有的条件是？;不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上。;在调查中需要了解企业的生产技术、产品的种类和产量、销售渠道和销售情况等，这样才有可能对企业的经营状况进行正确的判断。;;原理：①;;;;;1、选什么样的材料实验更易成功？用洋葱做材料，为什么要充分研磨？;1.??列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述,错误的是 ()

A.羊的成熟红细胞可作为提取DNA的材料

B.在洋葱研磨液经离心后的上清液中加入冷酒精的目的是获得含杂质少的DNA

C.预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性,防止DNA水解

D.在沸水浴条件下,DNA与二苯胺反应呈现蓝色;C;XbaⅠ,产生了相同的黏性末端;(1)限制酶是一类酶,而不是一种酶()

(2)切割质粒的限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列()

(3)限制性内切核酸酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶()

(4)若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性内切核酸酶,则一定有利于该

重组质粒进入受体并保持结构稳定()

(5)DNA连接酶能将两碱基通过氢键连接起来()

(6)E.coliDNA连接酶既可连接平末端,又可连接黏性末端()

(7)限制酶也可以识别和切割RNA()

(8)若两种限制酶的识别序列相同,则形成的末端一定能通过DNA连接酶相互连接。()

(9)在基因工程操作中,真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的()

(10)获取一个目的基因需限制酶切割2次,共产生2个游离的磷酸基团();(11)基因工程是人工操作导致的染色体变异，变异是不定向的()

(12)DNA连接酶可以连接目的基因与载体的氢键，形成重组DNA()

(13)质粒通常采用抗生素合成基因作为标记基因()

(14)DNA鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色()

(15)粗提取DNA时的过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解()

(16)动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行()

(17)用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量相近()