干细胞与iPS技术培训课件.ppt

;LucasCranach,1472-1553;自然界中生物的再生现象;20世纪初，遗传学家ThomasMorgan利用涡虫〔flatworm,Planaria〕为材料研究过再生问题。研究说明切割下来的组织块小到涡虫虫体的1/279时仍然能够再生出一条小涡虫。因此,涡虫又被誉为“切不死的动物〞。他将这个过程称为变形再生〔morphallaxis〕。

再生组织是由伤口处已分化细胞的去分化衍生而来,还是来源于称为全能干细胞的neoblasts(未分化细胞),这是一个长期争论不休的问题。;后来研究发现，在涡虫体内有一种散布在全身，好似没什么功能的非常小的细胞，它们就是干细胞。

涡虫的干细胞能够转变成“其他任何种类的细胞〞，具有这种性质的细胞在生物学上被称为“全能干细胞〞。;第一节干细胞;二.干细胞特性及分类;

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缓慢性;3，干细胞的分化特点

1〕.多潜能性;;;〔1〕去分化一种干细胞向其前体细胞的逆向转化的过程。

〔2〕转分化〔transdifferentiation〕一种组织类型的干细胞在适当条件下分化为另一种组织类型细胞的过程。

?例一：将成年雄性小鼠的造血干细胞移植到雌鼠体内，3天后在雌鼠的神经胶质细胞中检测到Y染色体的存在，证明成体动物的造血干细胞可转分化成为神经胶质细胞。;;〔二〕干细胞的别离与纯化

1.通过干细胞外表的标记分子进行

造血干细胞标记物为CD34＋等；神经干细胞的巢素蛋白。

2.通过干细胞不同于一般分化细胞的物理特性进行

干细胞不被Hoechst33342和Rhodamine123染色。;三，干细胞的分类;;;;;;;;;;;先前一直认为，高等动物的细胞分化是一个不可逆的过程，因此无法利用已分化的动物细胞进行克隆的。

英国剑桥大学的约翰?戈登教授首先通过实验研究从理论上证明了动物细胞重新编程是完全有可能的，1962年，他通过实验把青蛙肠上皮的细胞的细胞核移植进入去掉核的卵母细胞质中，并培育出成体青蛙。这一实验首次证实分化了的细胞基因组是可以逆转变化的，具有划时代的意义，并且为动物克隆实验奠定了根底，大名鼎鼎的克隆羊多利就是依照戈登所创造的方法被克隆出来的。;克隆羊Dolly的诞生;;轰动世界的黄禹锡造假事件;;黄禹锡东山再起;克隆人？;;d.??有转录因子Oct-4的表达;;〔二〕成体干细胞;科学家鉴定或别离出多种成体组织的干细胞，

造血干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞等等。;有没有相对简单，又可摆脱材料来源和伦理学诸多限制，重编程的效率和程度都十分可观的新方法呢？;;;;诱导iPS细胞四个基因的选择;材料：HDF-Slc7a1

高加索36岁女性脸部皮肤

0天：转入基因Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4

6天：放置于mytomycinC-treatedSNLfeedercell中(5×104~5×105)

7天：置換成干细胞专用培养液

;B、HDF形态

D、25天后形成颗粒状群落(与hES形态相似)

C、14天后形成之颗粒状群落;从顆粒狀群落中挑出类似hES细胞的群落：7/122，8/84，8/171，5/73，6/122，11/213

发育成紧密堆叠且扁平状的群落

类似hES：细胞核大、細胞质少

会自发性分化

需要feedercell才可生存

;iPS细胞检测-hESmarker表现;iPS细胞检测-hESmarker表现;iPS细胞检测-hESmarker表现;端粒酶活性测试;;;心肌细胞的markergene;;英国剑桥大学发育生物学家约翰·格登;;;山中伸弥教授语录;感谢大家一直以来的支持与配合!