人教版教学课件基因工程基本操作程序.pptVIP

（3）花粉通道法植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。我国转基因抗虫棉就是用这种方法获得方法:显微注射技术操作程序:提纯含目的基因表达载体取受精卵显微注射早期胚胎新性状动物早期胚胎培养技术输卵管或子宫胚胎移植技术受体细胞？原因？受体细胞：受精卵受精卵的全能性高一定是体内受精吗？不，可以体内受精也可体外受精2、将目的基因导入动物细胞3、将目的基因导入微生物细胞常用法：常用菌：过程：感受态细胞Ca2+处理大肠杆菌繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少Ca2+改变细胞膜的通透性，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态微生物作受体细胞原因：表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNACa2+处理法大肠杆菌植物基因工程动物基因工程微生物基因工程常用方法受体细胞比较目的基因导入不同细胞的方法农杆菌转化法显微注射法Ca2+处理法体细胞受精卵原核细胞1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤一、目的基因的获取(一)目的基因主要是______________________,也可是一些具有调控作用的因子。目的基因的获取方法主要有____________和___________两大类编码蛋白质的基因（二）获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成法（反转录法和化学合成法）如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因等。直接分离法人工合成法1、从基因文库中获取目的基因（1）基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库基因非编码区：非编码区：调控序列编码区：编码蛋白质终止子：终止转录启动子：启动转录，RNA聚合酶结合识别位点mRNA翻译特定功能的蛋白质转录特点：编码区是连续的，非编码区起调控作用DNA分子原核细胞基因结构：基因非编码区：非编码区：编码区：编码蛋白质终止子启动子前体mRNA外显子和内含子都转录特点：编码区间隔不连续！分为内含子和外显子。编码蛋白质不编码蛋白质剪切掉内含子转录的部分mRNADNA分子真核细胞基因结构：（2）基因文库的构建方法提取某种生物的全部DNA适当的限制酶一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组DNA分子基因组文库导入受体菌①基因组文库的构建有启动子和内含子提取某生物特定发育时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库逆转录酶DNA聚合酶导入受体菌②cDNA文库的构建-----逆转录法：部分基因：基因的选择性表达无启动子和内含子真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？01真核生物：无非编码区和内含子02原核生物：无非编码区03思考？构建基因文库的目的怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?便于在不知道目的基因核苷酸序列的情况下，获得所需的目的基因。010203依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性从基因文库中得到目的基因的方法2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术。②原理：__________多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制③前提__________一段已知目的基因的核苷酸序列④过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链d.重复步