色谱分析-仪器.pptVIP

赵龙山

分析化学教研室

;高效液相色谱仪;一、液相色谱仪器;三、流程及主要部件;〔一〕高效液相色谱仪的组成局部;贮液罐与流动相脱气;流动相;进样器：平头进样器。

预柱：保护色谱柱。尤其是中药和生物样品，必须使用。可以反冲。

色谱柱：按照流动相流动方向安装。安装后检查是否漏，用滤纸〔观察柱压〕。要观察废液缸流出的流动相体积。

检测器：按照需要选择。

记录系统：按照需要选择。;高压输液泵及梯度洗脱装置;高压输液泵可分为两类：恒流泵和恒压泵。

恒压泵：主要指气动放大泵，泵出口压力在系统中是恒定的，流速由柱的阻力决定。

恒流泵：包括往复柱塞泵和螺旋柱塞泵，这类泵输出的溶剂流量是恒定的，柱前的压力由柱后的阻力及系统气密性决定。恒压泵和恒流泵是指这两种泵的工作原理，并不说明泵的操作方式。借助于电子控制电路，往复泵和柱塞泵也可以按恒压方式操作。唯有气动放大泵只能恒压操作。;1.气动放大泵

气动放大泵是根据压力传递原理而设计的。气动泵有两个界面，气体推动的截面大，推动溶剂的截面小。由于截面两端压力相等，那么输出截面的压强正比于两个截面的比值。只要这种比值足够大，那么输出的溶剂可以获得很高的压力。;2.往复柱塞泵

目前作为商品出售的高压恒流泵多为往复柱塞泵。在电机驱动下，柱塞杆在泵头内作作线性往复运动，完成将流动相吸入泵头然后再输出的过程。

(1)工作过程

在吸液过程中，由于柱塞的运动而在泵腔内形成负压。此时由于色谱柱的存在，泵头外的压力显然高于泵头内，在这种情况压差下，出口单向阀的宝石球落回到阀座上；而入口单向阀因为外界大气压大于泵腔内的压力，宝石球离开阀座，流动相顺利地进入泵腔;(2)往复柱塞泵的特性

往复柱塞泵每往复一次输出的流量由柱塞的截面积和冲程决定。单位时间输出的液体流量由单位时间内柱塞往复的次数决定。

往复泵可以连续不断的以恒定的流量输送液体，同时更换溶剂非常方便，特别适用于梯度洗脱的需要。

往复泵的缺点在于柱塞是往复运动地，输出流量和泵压力有波动性。在系统压力过高时有反吸??象。

(3)多头往复泵

为降低液体输送过程中所产生的脉动，最有效的方法是采用多头往复泵，由专门设计的驱动装置保证在任一瞬间都有液体输出，以降低波动。;(4)四元泵〔单元泵〕〔HP1100〕;(5)二元泵;3.螺旋柱塞泵

因其工作原理与注射器类似，也称为注射泵。

螺旋柱塞泵和往复泵的原理完全不同。电机以一定的转速通过螺杆旋转驱动柱塞上下移动。柱塞向下移动时，将液体吸入缸内，一次吸入数十毫升，可快速进行。柱塞向上移动时将液体排出。流量通过电机转速控制。;梯度洗脱装置;低压梯度洗脱系统：

常压下将溶剂按程序混合，用一台高压泵送入色谱柱

高压梯度洗脱系统：

两台高压泵将溶剂增压后送入梯度混合室混合，再送入色谱柱;1.低压梯度洗脱〔泵前混合〕;2.高压梯度〔泵后混合〕;进样系统;2.自动进样器

自动进样器是由计算机自动控制定量阀，按标准编制注射样品的操作程序工作。取样、进样、样品管路清洗和样品盘的转动均按预定程序自动进行，一次可进行上百个样品分析。;;2.自动进样器;柱材料及规格

1.柱材料：内壁抛光的不锈钢管

2.柱规格：直型。内径4.6mm或3.9mm；长度10~50cm

柱温控制

用柱温箱控制柱温。;色谱柱的测试与维护;色谱柱的选择;色谱柱的使用;〔二〕检测器;检测器;HPLC中使用的检测器种类

1.按检测器用途分类：检测器可分为通用型检测器〔加和性质〕和选择性检测器〔溶质性质〕。

通用型检测器是利用连续测定色谱柱流出物质某些具有普遍性的物理参数如折光指数、介电常数等而设计的检测器。根据吸馏液〔样品与溶剂的混合物〕与溶剂相同性质的差异检测被分析物质。这种检测器具有广泛的适用性，但灵敏度低，容易受外界因素如温度、流速、流动相组成等的影响，因此限制了使用范围。

选择性检测器是利用测定某些物质特有的性质如紫外吸收、荧光等而设计的检测器，一般来说其灵敏度要比通用型检测器的灵敏度高102～103倍或者更高，并且受外界因素包括流动相的组成变化影响极小或者没有，但是在使用上仅限于测定对检测器有相应的物质。;2.按检测器测量性质分类：检测器可分为浓度型检测器和质量型检测器。

浓度型检测器是连续测定样品溶液的浓度变化，是反映总体性质的检测器，例如紫外、荧光 或示差检测器就属于此类。

质量型检测器是测量样品的总量，库仑、同位素或质谱检测器就属于这一类。;3.按测量原理分类：检测器可分为光学检测器和电学检测器。

由于检测器是影响色谱中的薄弱环节，所以世界各国在研究开发方面投入了大量的精力和财力。从目前发表的文献统计数据来看，光学检测器〔包括