黄花菜多糖抗炎及抑菌的活性研究.pdf

中文摘要

黄花菜（HemerocalliscitrinaBaroni,HcB）是一种药食同源的蔬菜，具有重要的

药用价值和观赏价值。其化学成分很复杂，内含糖类、多酚类、蛋白质、蒽醌类等

多种活性物质，具有安神、止血、消炎、抗抑郁等功效。现阶段，研究已表明黄花

菜提取的活性物质具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用。本课题组前期已从黄花菜

中提取并纯化出多糖，并将其命名为HcBPS2。本研究以HcBPS2为研究对象，探究

其体外抗炎作用及抑菌作用。主要研究内容包括以下四部分：

第一部分：HcBPS2通过抑制氧化应激拮抗LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。

MTT法检测结果表明，浓度为0-50μg/mLHcBPS2对RAW264.7细胞存活无明显影

响。用脂多糖诱导RAW264.7细胞建立炎症模型，HcBPS2处理RAW264.7炎症细胞，

实验结果表明，LPS刺激RAW264.7细胞，细胞产生的NO含量显著增加，细胞吞

噬能力增强；与模型组相比，用5μg/mL和10μg/mLHcBPS2处理过的RAW264.7

细胞中NO生成量显著降低，细胞吞噬能力减弱。采用qRT-PCR法检测，结果表明

HcBPS2能显著降低经LPS诱导后的RAW264.7细胞中炎症因子mRNA表达。进一

步研究了HcBPS2对RAW264.7细胞炎症模型氧化应激的影响。结果表明，HcBPS2

可以抑制LPS诱导细胞引起的MDA和ROS的含量增加，SOD活性和GSH含量下

降。

第二部分：HcBPS2通过调节PKM2拮抗LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。用5

μg/mL和10μg/mL的HcBPS2作用于LPS诱导的RAW264.7细胞，结果发现，与模

型组相比，HcBPS2处理后，PKM2总蛋白，质蛋白与核蛋白水平明显降低，同时

PKM2酶活性被明显抑制；细胞的葡萄糖摄入量与乳酸生成量减少；糖酵解相关蛋

白HK2、GLUT1、LDHAmRNA表达明显降低。进一步检测了HcBPS2处理对HIF-1α

和STAT3的影响。结果表明，HcBPS2处理抑制LPS诱导的HIF-1α表达和磷酸化

STAT3蛋白水平上调。

第三部分：HcBPS2通过TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎

症。采用免疫印迹法检测HcBPS2对LPS诱导RAW264.7细胞中受体蛋白TLR4与

NF-κB蛋白水平与核移位的影响。结果显示，LPS刺激RAW264.7细胞后，TLR4蛋

白水平显著上调，而用5μg/mL和10μg/mL的HcBPS2预处理会显著降低TLR4蛋

白水平。LPS刺激RAW264.7细胞，细胞中NF-κBp65总蛋白水平无明显变化，而细

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胞质中的NF-κB蛋白水平显著降低，细胞核中NF-κBp65蛋白水平明显增加，而

HcBPS2预处理抑制了LPS对RAW264.7细胞NF-κBp65的影响。这些结果表明用

HcBPS2预处理可以逆转细胞质与细胞核中NF-κBp65蛋白水平。

第四部分：HcBPS2的体外抑菌作用。用滤纸片方法确定了8mg/mL、9mg/mL、

10mg/mL的HcBPS2具有抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生长的作用。进一步检测

了HcBPS2对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的蛋白核酸泄露、细胞膜完整性、细胞壁

完整性的影响。结果显示，HcBPS2不同程度地破坏了大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的

细胞膜与细胞壁，促进菌内蛋白与核酸的泄露。

综上所述，HcBPS2可以拮抗LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。此外，HcBPS2

具有抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的作用。

关键词：黄花菜多糖；抗炎；氧化应激；有氧糖酵解；抑菌；NF-κB信号通路

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ABSTRACT

HemerocalliscitrinaBaroni(HcB)isakind