池蝶蚌论文池蝶蚌亲环蛋白A(CyPA)基因特异性表达及多克隆抗体制备.pdf

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池蝶蚌论文：池蝶蚌亲环蛋白A（CyPA）基因特异性表达及

多克隆抗体制备

【中文摘要】池蝶蚌(Hyriopsisschlegelii)原产于日本滋贺县

琵琶湖,是日本特有的淡水贝类养殖品种。它隶属于软体动物门、瓣

鳃纲、蚌科、与三角帆蚌一样为帆蚌属。与其他淡水珍珠贝类相较,

池蝶蚌拥有更好的抗病能力和育珠性能。亲环蛋白(Cyclophilins

CyPs)是一种广泛存在于各种生物中的组成型蛋白,具有多种生物学

功能。其最重要的两个生物学功能：一是具有肽基脯氨酸顺／反异构

酶(peptidyl-prolylcis-transisomerases,PPIase)活性能催化蛋

白质折叠和转运过程并起着分子伴侣作用；二是具有免疫抑制功能,

在体内能介导T细胞进行免疫抑制。CyPA是第一个被发现的CyP家

族蛋白。必威体育精装版研究表明CyPA可能在某些生物中具有免疫应激功能。

本研究依据从嗜水气单胞杆菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库里获得

了池蝶蚌CyPA基因(以下简称HsCypA)cDNA全长,对CypA基因在池

蝶蚌中的表达特征和是否存在免疫应激功能进行初步的探索,为研究

CyPA基因在淡水贝类中的功能打下基础,为研究无脊椎动物的免疫机

制提供一个新的方向。主要研究内容如下：1、利用Real-TimePCR

分析了池蝶蚌CyPA基因mRNA在池蝶蚌血液、心、鳃、肠、肝、肾、

斧足、性腺等组织及各年龄血淋巴细胞中的表达情况,结果显示

HsCyPA基因在各组织中均有表达,其中在肝脏和性腺中表达量最高,

在肠和血淋巴中最低；在各年龄中仅在幼龄中的表达量略高于成年蚌,

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这可能是幼龄蚌血淋巴细胞中的蛋白质合成更加丰富的缘故。2、利

用Real-TimPCR技术对嗜水气单胞杆菌诱导刺激后池蝶蚌肝脏、性

腺和血液中CyPA基因mRNA的表达量进行了分析,发现在肝脏和性腺

中CyPA在诱导4h出现一个表达峰,8h后开始下降,这表明了HsCyPA

基因参与了池蝶蚌的免疫系统的应激反应。3、利用PET-32a(+)表达

载体,依据HsCyPA基因cDNA的序列,构建了含有完整开放阅读框(ORF)

的表达载体并进行原核表达。经优化诱导条件后,亲和层析获得了含

量较高的上清可溶性蛋白。糜蛋白偶联法显示HsCyPA蛋白具有

PPLas酶活性。ELISA间接效价测定显示免疫大白兔所获得的多克隆

抗体的效价为1：640000。这为进一步研究HsCyPA蛋白的功能提供

了实验基础。本研究对CyPA基因在池蝶蚌免疫系统中承担的功能做

了初步的研究,丰富了贝类免疫系统中的防御机制,为无脊椎动物免

疫学的研究提供了一定的理论依据。

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【英文摘要】Hyriopsisschlegelii,originatedintheLake

BiwaofJapan,wasintroducedtoChinain1997.Comparedwith

otherfreshwaterpearlmussel,theH.schlegeliiisadvantage

inrateofgrowth,disease-resistanceand

breed-pearling.Cyclophilinswithavarietyoffunctionshave

beenwidelyidentifiedindiverseorganismsfrom

microorganismstomammals.Ithastwoimportantfunctions,one

isthecis-transpeptidyl-prolylisomerase(PPIase),which

catalyticproteinfoldingandseversasmolecularchaperones

duringprotei