实验动物胚胎工程技术.pptVIP

**第三节动物体细胞克隆技术**克隆（clone）的概念克隆是指无性繁殖或拷贝。无性生殖在植物中很常见，在动物中过去认为是不可能的。动物克隆是指动物通过体细胞核移植后生产出基因型几乎与供体完全相同的后代。**核移植（Nucleartransfer）是指将动物细胞的细胞核移植到另一个体的去核卵母细胞胞质中，通过电激活，使供体核重编程序，形成的重构卵在体外培养成胚胎，最后通过胚胎移植，使之发育成个体。如果受体去核卵和供体移入的核来自同种动物，则称种内核移植，来自不同的种则称为种间核移植。核移植由于没有经过精子和卵子的受精过程，核移植动物的全部遗传信息来自供体核细胞，等于是复制了提供细胞核的动物，因而把它俗称为“克隆”。**成年体细胞（已分化）胎儿成纤维细胞：出生前的胎儿（未分化或低分化）04单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。胚胎干细胞核移植（未分化）03单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。胚胎细胞核移植：未着床前的囊胚（未分化）02单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。根据供体核的来源不同，核移植包括以下几种：01**动物克隆的实验过程**动物克隆技术的意义与应用加快良种家畜的繁殖速度与体细胞转基因技术结合，能制备大家畜转基因动物拯救濒危野生动物治疗性克隆，用于再生医学**再生医学技术路线简介第四节干细胞技术****概述干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞。根据发育阶段，可将干细胞分为胚胎干细胞(embryonicstemcells，ES细胞)和成体干细胞(adultstemcells，AS细胞)。ES细胞存在于囊胚期胚胎的内细胞团中，是全能性、无限增殖的干细胞，在胚胎的生长发育过程中具有分化形成胎儿所有类型细胞、组织和器官的潜能。AS细胞是ES细胞定植于胎儿和成人的各种组织和器官中的“种子”，具有自我更新和分化为组织特异细胞的能力，即分化为相应组织和器官中细胞的“专能”细胞，包括神经干细胞、脂肪干细胞、造血干细胞、间充质干细胞、精原干细胞、皮肤干细胞和肝脏干细胞等。123****诱导性多潜能干细胞(Inducedpluripotentstemcells,iPS细胞)2006年,Takahashi等首次发现导入特定的转录因子基因能够使已分化的细胞重编程回归到胚胎细胞状态。他们通过慢病毒载体介导将Oct4、Sox2、c-Myc和Klf44种转录因子基因导入小鼠皮肤成纤维细胞,获得了具有强大的自我更新能力和分化潜能的多能性干细胞,命名为iPS细胞。这一研究克服了ES细胞和AS细胞应用存在的诸多问题，展现了广阔的应用前景，受到了整个生命科学领域的广泛关注。目前研究中较为理想的供体细胞主要有淋巴细胞(如T细胞和B细胞等)、脂肪细胞和皮肤成纤维细胞。**胚胎干细胞（ES细胞)来源：ES细胞是从胚胎发育早期囊胚（人胚胎受精后约5-7天，小鼠胚胎受精后3-4天）中的内细胞群分离出来的未分化细胞。内细胞群:具有未分化特性，可进一步分裂,分化形成内、中、外三个胚层。外胚层将分化为皮肤、眼睛和神经系统等中胚层将形成骨骼、血液和肌肉等组织内胚层将分化为肝、肺和肠等由于内细胞群可以发育成完整的个体，因而这些细胞被认为具有全能性。当内细胞群分离出来后在体外培养时，我们称之为ES细胞。**目前除了从小鼠、大鼠和人分离得到并建立ES细胞系外，还未从其它动物的囊胚中分离到ES细胞系。**ES细胞的培养ES细胞的培养条件极其苛刻，对培养液、试剂、胎牛血清、水等均需采用胚胎级，对培养器皿等必须清洗干净。一旦条件不适合，ES细胞容易发生分化，从而失去ES细胞的特性。未分化ES细胞的培养一般需要与用丝裂霉素处理过的成纤维细胞饲养层（Feedercell）共培养，饲养层细胞为ES细胞提供细胞因子来维持其未分化状态。在培养液中加用白血病抑制因子（LeukemiaInhibitoryFactor，LIF）能更有效地维持未分化的ES细胞。（三）ES细胞的鉴定ES细胞是一种正常的胚胎性干细胞，具有正常的染色体核型和体内外分化的潜能。在建系之初需要对其核型、分化能力和细胞标志物进行鉴定1．核型2．体外分化试验将ES细胞在无饲养层、低胎牛血清的培养液中悬浮培养，数天后形成胚样小体（embryoidbodies）的内皮样大型细胞团；向成纤维细胞、心肌细胞以及造血细胞的分化。3．体内分化试验